论文目录 | |
| 符号说明 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 WRKY转录因子研究进展 | 第12-18页 |
| 1.1.1 WRKY转录因子的结构与分类 | 第13-15页 |
| 1.1.2 WRKY转录因子的进化 | 第15-16页 |
| 1.1.3 WRKY转录因子的生物学功能 | 第16-18页 |
| 1.1.3.1 WRKY转录因子在非生物胁迫中的作用 | 第16-17页 |
| 1.1.3.2 WRKY转录因子在生物胁迫中的作用 | 第17-18页 |
| 1.1.3.3 WRKY转录因子参与其他生理过程 | 第18页 |
| 1.2 核桃炭疽病研究进展 | 第18-22页 |
| 1.2.1 核桃炭疽病及其危害 | 第19-21页 |
| 1.2.2 核桃炭疽病的防治研究 | 第21页 |
| 1.2.3 核桃抗炭疽病基因研究 | 第21-22页 |
| 1.3 本研究的目的意义 | 第22-23页 |
| 1.4 技术路线图 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-37页 |
| 2.1 材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 供试菌株和载体 | 第24页 |
| 2.1.3 酶及主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.5 引物 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-37页 |
| 2.2.1 生物信息学分析 | 第26页 |
| 2.2.2 植物材料的处理 | 第26-27页 |
| 2.2.3 植物总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3.1 RNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.3.2 RNA质量检测 | 第27-28页 |
| 2.2.4 cDNA第一链的合成 | 第28-29页 |
| 2.2.5 JrWRKY4和JrWRKY21转录因子的克隆 | 第29页 |
| 2.2.6 PCR产物的回收 | 第29-30页 |
| 2.2.7 T载体的连接 | 第30页 |
| 2.2.8 荧光定量PCR分析 | 第30-31页 |
| 2.2.8.1 反转录 | 第30-31页 |
| 2.2.8.2 实时荧光定量分析 | 第31页 |
| 2.2.9 转化大肠杆菌 | 第31页 |
| 2.2.10 PCR检测阳性克隆 | 第31-32页 |
| 2.2.11 质粒的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.12 质粒酶切 | 第33页 |
| 2.2.13 构建表达载体 | 第33页 |
| 2.2.14 转化农杆菌 | 第33-34页 |
| 2.2.15 亚细胞定位实验 | 第34-35页 |
| 2.2.16 转基因拟南芥 | 第35-37页 |
| 2.2.16.1 拟南芥的侵染 | 第35页 |
| 2.2.16.2 转基因拟南芥的筛选和鉴定 | 第35-37页 |
| 2.2.16.3 转基因拟南芥的炭疽病抗性鉴定 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-60页 |
| 3.1 核桃WRKY转录因子家族的生物信息学分析 | 第37-45页 |
| 3.1.1 核桃WRKY转录因子的序列特征分析 | 第37-41页 |
| 3.1.2 核桃WRKY转录因子系统进化分析 | 第41-42页 |
| 3.1.3 核桃WRKY转录因子保守元件分析 | 第42-45页 |
| 3.2 JrWRKY4和JrWRKY21转录因子的克隆和序列特征分析 | 第45-49页 |
| 3.3 核桃JrWRKY4和JrWRKY21蛋白同源比对与进化分析 | 第49-52页 |
| 3.4 JrWRKY4和JrWRKY21的表达模式分析 | 第52-54页 |
| 3.5 亚细胞定位 | 第54-55页 |
| 3.6 转基因拟南芥的炭疽病抗性实验 | 第55-60页 |
| 3.6.1 转基因拟南芥的筛选与鉴定 | 第55-58页 |
| 3.6.1.1 卡那霉素筛选 | 第55-56页 |
| 3.6.1.2 PCR检测转基因植株 | 第56-57页 |
| 3.6.1.3 qRT–PCR技术筛选转基因拟南芥株系 | 第57-58页 |
| 3.6.2 转JrWRKY4和JrWRKY21拟南芥对炭疽病抗性的检测 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 4.1 核桃WRKY转录因子家族生物信息学分析 | 第60-61页 |
| 4.2 核桃JrWRKY4和JrWRKY21转录因子的克隆与序列分析 | 第61-62页 |
| 4.3 核桃JrWRKY4和JrWRKY21转录因子表达模式分析 | 第62页 |
| 4.4 转基因拟南芥对炭疽病抗性分析 | 第62-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-75页 |
| 附录 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
