论文目录 | |
| 符号说明 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-24页 |
| 1.1 研究目的意义 | 第10-11页 |
| 1.2 丹参研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2.1 丹参活性成分及药理作用 | 第11页 |
| 1.2.2 丹参的次生代谢研究 | 第11-13页 |
| 1.2.3 丹参的遗传转化研究 | 第13页 |
| 1.3 PAL 基因研究进展 | 第13-14页 |
| 1.4 植物的遗传转化 | 第14-15页 |
| 1.5 根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第15-16页 |
| 1.6 根癌农杆菌介导遗传转化的机理 | 第16-17页 |
| 1.7 影响农杆菌转化的因素 | 第17-18页 |
| 1.7.1 不同菌株对转化的影响 | 第17页 |
| 1.7.2 农杆菌菌液浓度和侵染时间对转化的影响 | 第17页 |
| 1.7.3 外植体前处理和乙酰丁香酮对转化的影响 | 第17-18页 |
| 1.8 CRISPR/Cas研究进展 | 第18-24页 |
| 1.8.1 CRISPR系统 | 第19页 |
| 1.8.2 CRISPR/Cas系统的基本结构 | 第19页 |
| 1.8.3 CRISPR/Cas的分类 | 第19-20页 |
| 1.8.4 CRISPR/Cas系统作用机制 | 第20页 |
| 1.8.5 PAM位点和sgRNA | 第20-21页 |
| 1.8.6 CRISPR/Cas9的优缺点 | 第21-22页 |
| 1.8.7 CRISPR/Cas9的应用 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-32页 |
| 2.1 材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.2 仪器与试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 质粒载体和菌株种类 | 第24页 |
| 2.1.4 培养基配制 | 第24-25页 |
| 2.1.5 常用试剂配制 | 第25页 |
| 2.2 农杆菌介导的丹参遗传转化体系优化 | 第25-28页 |
| 2.2.1 丹参叶片组织培养激素条件优化 | 第25页 |
| 2.2.2 潮霉素筛选浓度的确定 | 第25页 |
| 2.2.3 质粒转入农杆菌及阳性克隆鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.4 农杆菌侵染 | 第26页 |
| 2.2.5 除菌抗生素种类、浓度的筛选 | 第26页 |
| 2.2.6 单因素试验 | 第26-27页 |
| 2.2.7 正交试验设计 | 第27-28页 |
| 2.2.8 转基因植株的检测 | 第28页 |
| 2.3 利用CRISPR/Cas9技术对丹参SmPAL1基因进行基因编辑 | 第28-32页 |
| 2.3.1 外植体预培养 | 第28页 |
| 2.3.2 sgRNA设计 | 第28-29页 |
| 2.3.3 体外靶点效率检测 | 第29页 |
| 2.3.4 Cas9/sgRNA-PAL1载体构建与鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.5 质粒转化农杆菌 | 第30页 |
| 2.3.6 农杆菌侵染丹参叶片 | 第30-31页 |
| 2.3.7 除菌培养和筛选培养 | 第31页 |
| 2.3.8 转基因植株检测 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-51页 |
| 3.1 农杆菌介导的丹参遗传转化体系优化 | 第32-41页 |
| 3.1.1 丹参无菌苗的获得 | 第32页 |
| 3.1.2 丹参叶片组织培养激素条件优化 | 第32-34页 |
| 3.1.3 潮霉素筛选浓度的确定 | 第34页 |
| 3.1.4 除菌抗生素种类、浓度的筛选 | 第34-35页 |
| 3.1.5 农杆菌阳性克隆鉴定 | 第35-36页 |
| 3.1.6 单因素试验 | 第36-38页 |
| 3.1.7 正交试验 | 第38-40页 |
| 3.1.8 转基因植株的获得与检测 | 第40-41页 |
| 3.2 利用CRISPR/Cas9技术对SmPAL1基因进行基因编辑 | 第41-51页 |
| 3.2.1 SmPAL1基因的生物信息学分析与sgRNA设计 | 第41-43页 |
| 3.2.2 体外靶点效率检测 | 第43-44页 |
| 3.2.3 Cas9/sgRNA-PAL1载体构建与鉴定 | 第44-47页 |
| 3.2.4 转基因植株的获得与检测 | 第47-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| 4.1 农杆菌介导的丹参遗传转化体系优化 | 第51-53页 |
| 4.1.1 潮霉素筛选浓度的确定 | 第51页 |
| 4.1.2 除菌抗生素种类、浓度的筛选 | 第51-52页 |
| 4.1.3 丹参遗传转化体系的优化 | 第52-53页 |
| 4.2 利用CRISPR/Cas9技术对SmPAL1基因进行基因编辑 | 第53-54页 |
| 4.2.1 体外靶点效率检测 | 第53页 |
| 4.2.2 CRISPR/Cas9系统的编辑效率和脱靶效应 | 第53-54页 |
| 4.3 丹参次生代谢的调控 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 5.1 农杆菌介导的丹参遗传转化体系优化 | 第55页 |
| 5.2 利用CRISPR/Cas9技术对SmPAL1基因进行基因编辑 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第64页 |
