论文目录 | |
| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 1 前言 | 第15-27页 |
| 1.1 禽流感病毒简介 | 第15页 |
| 1.1.1 病原体 | 第15页 |
| 1.1.2 病原的生物学特性 | 第15页 |
| 1.2 H9N2流感病毒 | 第15-19页 |
| 1.2.1 流行病学 | 第15-16页 |
| 1.2.2 H9N2病毒继发细菌感染 | 第16-17页 |
| 1.2.3 H9N2病毒继发细菌感染的机制 | 第17页 |
| 1.2.4 继发细菌感染的科学假说 | 第17-19页 |
| 1.3 蛋白质组学的研究进展 | 第19-22页 |
| 1.3.1 蛋白质组学主要研究内容 | 第19-20页 |
| 1.3.2 蛋白质组学的主要研究技术 | 第20-22页 |
| 1.3.2.1 双向电泳技术 | 第20页 |
| 1.3.2.2 液相色谱技术 | 第20-21页 |
| 1.3.2.3 质谱分析技术 | 第21页 |
| 1.3.2.4 iTRAQ技术 | 第21页 |
| 1.3.2.5 生物信息技术 | 第21-22页 |
| 1.3.3 蛋白质组学技术在流感病毒研究中的应用 | 第22页 |
| 1.4 毕赤酵母表达系统的概述 | 第22-26页 |
| 1.4.1 毕赤酵母简介 | 第22-23页 |
| 1.4.2 毕赤酵母表达系统的优点 | 第23-24页 |
| 1.4.3 宿主菌株 | 第24-25页 |
| 1.4.4 表达载体 | 第25页 |
| 1.4.5 毕赤酵母的诱导表达 | 第25-26页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第26-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-38页 |
| 2.1 病毒,细菌和细胞 | 第27-28页 |
| 2.1.1 病毒毒株 | 第27-28页 |
| 2.1.2 细菌株 | 第28页 |
| 2.1.3 细胞 | 第28页 |
| 2.2 试剂和仪器 | 第28-29页 |
| 2.3 H9N2亚型AIV对大肠杆菌粘附宿主细胞的影响 | 第29-30页 |
| 2.3.1 体外实验验证H9N2亚型AIV对大肠杆菌粘附宿主细胞的影响 | 第29页 |
| 2.3.2 体内实验验证H9N2亚型AIV对大肠杆菌粘附宿主细胞的影响 | 第29-30页 |
| 2.4 蛋白质组学iTRAQ分析 | 第30-33页 |
| 2.4.1 蛋白样品准备 | 第30页 |
| 2.4.2 蛋白质提取及含量测定 | 第30-31页 |
| 2.4.3 还原烷基化、酶解及iTRAQ试剂标记 | 第31页 |
| 2.4.4 第一维高pH反相液相(pH-RPLC)分离 | 第31-32页 |
| 2.4.5 液相串联质谱 | 第32页 |
| 2.4.6 生物信息学分析 | 第32-33页 |
| 2.5 TGF-β1毕赤酵母阳性转化子的构建 | 第33-37页 |
| 2.5.1 TGF-β1基因的PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.5.2 TGF-β1基因的克隆与测序 | 第34-35页 |
| 2.5.3 pPIC9-TGF-β1重组表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 2.5.4 重组pPIC9-TGF-β1质粒线性化 | 第36页 |
| 2.5.5 毕赤酵母阳性转化子的构建 | 第36-37页 |
| 2.6 TGF-β1蛋白的诱导表达、鉴定及纯化 | 第37-38页 |
| 2.6.1 TGF-β1蛋白的表达与获取 | 第37页 |
| 2.6.2 TGF-β1蛋白的SDS-PAGE分析及WesternBlot鉴定 | 第37-38页 |
| 2.7 添加外源TGF-β1蛋白对APEC粘附宿主细胞的影响 | 第38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-53页 |
| 3.1 H9N2亚型AIV对大肠杆菌粘附宿主细胞的影响 | 第38-41页 |
| 3.1.1 体外实验验证H9N2亚型AIV对大肠杆菌粘附宿主细胞的影响 | 第38-39页 |
| 3.1.2 体内实验验证H9N2亚型AIV对大肠杆菌粘附宿主细胞的影响 | 第39-41页 |
| 3.2 蛋白质组学iTRAQ分析结果 | 第41-48页 |
| 3.2.1 蛋白样品准备 | 第41-42页 |
| 3.2.2 蛋白质的含量测定 | 第42-43页 |
| 3.2.3 生物信息学分析结果 | 第43-48页 |
| 3.2.3.1 总蛋白的GO功能分类 | 第43-44页 |
| 3.2.3.2 iTRAQ联合多维LC-MS/MS技术分析的蛋白图谱 | 第44-45页 |
| 3.2.3.3 差异表达蛋白的功能分类 | 第45-46页 |
| 3.2.3.4 差异表达蛋白的GO富集分析 | 第46-47页 |
| 3.2.3.5 差异表达蛋白的KEGG富集分析 | 第47-48页 |
| 3.3 TGF-β1毕赤酵母阳性转化子的构建 | 第48-51页 |
| 3.4 重组TGF-β1蛋白的分泌表达 | 第51-52页 |
| 3.5 添加外源TGF-β1蛋白对APEC粘附宿主细胞的影响 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第70-71页 |
| 个人简介 | 第71页 |
