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菜豆普通花叶病毒(BCMV)花生条纹株系复制和翻译调控的初步研究

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菜豆普通花叶病毒(BCMV)花生条纹株系复制和翻译调控的初步研究
论文目录
 
符号说明第1-8页
中文摘要第8-9页
Abstract第9-10页
1 前言第10-19页
  1.1 菜豆普通花叶病毒(BCMV)第10-14页
    1.1.1 菜豆普通花叶病毒引起的花生条纹病第10页
    1.1.2 BCMV的分子生物学特征第10-12页
    1.1.3 BCMV编码的部分蛋白功能第12-14页
      1.1.3.1 HC-Pro蛋白第12-13页
      1.1.3.2 核内含体蛋白b(Nib)第13页
      1.1.3.3 VPg蛋白第13-14页
  1.2 植物RNA病毒基因组的翻译调控第14-16页
  1.3 植物RNA病毒基因组的复制调控第16-18页
    1.3.1 正单链RNA病毒基因组复制第16-17页
    1.3.2 病毒编码的RdRp蛋白的获得第17-18页
  1.4 本研究的目的和意义第18-19页
2 材料和方法第19-33页
  2.1 材料第19-20页
    2.1.1 质粒,种子和菌株第19页
    2.1.2 花生条纹病的疑似样品第19页
    2.1.3 试验仪器及设备第19页
    2.1.4 分子生物学试剂第19页
    2.1.5 引物及测序第19-20页
  2.2 方法第20-33页
    2.2.1 植物总RNA的提取第20页
    2.2.2 RT-PCR检测第20-21页
    2.2.3 重叠PCR第21-22页
    2.2.4 cDNA末端快速扩增(RACE)第22-24页
      2.2.4.1 3 ’RACE(cDNA3’末端快速扩增)第22页
      2.2.4.2 5 ’RACE(cDNA5’末端快速扩增)第22-24页
    2.2.5 核酸的沉淀和浓缩第24页
    2.2.6 PCR产物或酶切产物的胶回收第24-25页
    2.2.7 连接反应第25页
    2.2.8 大肠杆菌感受态细胞的制备第25页
    2.2.9 大肠杆菌感受态细胞的转化第25-26页
    2.2.10 菌落PCR筛选重组质粒第26页
    2.2.11 碱裂解法小量提质粒第26-27页
    2.2.12 酶切反应第27页
    2.2.13 体外转录第27-28页
    2.2.14 在麦胚提取物(WGE)中的体外翻译第28-29页
    2.2.15 原核表达第29-30页
    2.2.16 可溶性检测第30页
    2.2.17 蛋白亲和层析(MBP标签)第30-31页
    2.2.18 RdRp介导的体外复制实验第31-32页
    2.2.19 进化分析第32-33页
3 结果与分析第33-48页
  3.1 BCMV5’UTR和3’UTR对不依赖帽子翻译的调控作用第33-40页
    3.1.1 不同地区花生病样的BCMV检测第33-34页
    3.1.2 不同地区BCMV分离物的基因组5’UTR和3’UTR的克隆第34-38页
      3.1.2.1 BCMV3’RACE及3’UTR序列进化分析第34-37页
      3.1.2.2 BCMV5’RACE及5’UTR序列进化分析第37-38页
    3.1.3 BCMV的5’UTR和3’UTR对翻译的调控作用第38页
    3.1.4 BCMV的5’UTR核心调控区域的定位第38-40页
  3.2 BCMVNib介导的体外复制体系的创建第40-48页
    3.2.1 BCMVNib编码序列克隆及分析第40-44页
    3.2.2 BCMVNib原核表达载体构建第44页
    3.2.3 BCMVNib原核表达第44-46页
    3.2.4 BCMVRdRp可溶性蛋白的亲和层析第46页
    3.2.5 体外转录制备BCMV的不同RNA片段第46-47页
    3.2.6 BCMVNib介导的体外复制实验第47-48页
4 讨论第48-50页
  4.1 BCMV5’末端和3’末端序列第48页
  4.2 BCMV翻译调控第48页
  4.3 BCMVNib的纯化第48-50页
结论第50-51页
参考文献第51-58页
附表第58-65页
致谢第65页

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