论文目录 | |
中文摘要 | 第1-11页 |
Abstract | 第11-13页 |
1 前言 | 第13-19页 |
1.1 国内外研究进展 | 第13-18页 |
1.1.1 番茄组学研究进展 | 第13-14页 |
1.1.2 番茄果实发育及果形调控基因的研究进展 | 第14-15页 |
1.1.3 其他植物中调控器官形状基因的研究进展 | 第15-17页 |
1.1.4 番茄OFP家族基因的研究进展 | 第17-18页 |
1.2 研究目的和意义 | 第18-19页 |
2 材料与方法 | 第19-32页 |
2.1 实验材料 | 第19-20页 |
2.1.1 植物材料 | 第19页 |
2.1.2 菌株及质粒 | 第19页 |
2.1.3 酶及生化试剂 | 第19页 |
2.1.4 仪器设备 | 第19页 |
2.1.5 组织培养基 | 第19-20页 |
2.2 试验方法 | 第20-32页 |
2.2.1 RNA的提取方法 | 第20页 |
2.2.2 RNA反转录为cDNA | 第20-21页 |
2.2.3 候选基因SlOFP20的克隆与序列分析 | 第21页 |
2.2.4 载体设计与构建 | 第21-22页 |
2.2.4.1 过表达载体的构建 | 第21-22页 |
2.2.4.2 沉默载体的构建 | 第22页 |
2.2.5 目的基因的回收、连接、转化 | 第22-25页 |
2.2.5.1 回收目的基因片段 | 第22页 |
2.2.5.2 连接 | 第22-23页 |
2.2.5.3 大肠杆菌感受态DH5α转化及筛选 | 第23页 |
2.2.5.4 提取质粒 | 第23-24页 |
2.2.5.5 农杆菌感受态细胞制备 | 第24-25页 |
2.2.5.6 电击法转化农杆菌 | 第25页 |
2.2.6 番茄的遗传转化 | 第25-26页 |
2.2.7 DNA提取的方法 | 第26-27页 |
2.2.8 转基因株系的验证 | 第27页 |
2.2.9 番茄SlOFP20组织表达特异性 | 第27页 |
2.2.10 叶片、果实显微结构分析 | 第27-28页 |
2.2.11 植物根系活力的测定 | 第28页 |
2.2.12 茎粗、开花节位、果实重量和种子千粒重测定 | 第28页 |
2.2.13 植株生长曲线 | 第28页 |
2.2.14 转录组测序 | 第28-31页 |
2.2.14.1 建库测序流程 | 第28-30页 |
2.2.14.2 生物信息学分析流程 | 第30-31页 |
2.2.15 生物信息学分析网站 | 第31-32页 |
3 结果与分析 | 第32-58页 |
3.1 SlOFP20基因结构、亚细胞定位及启动子顺式作用元件的生物信息学分析 | 第32-33页 |
3.2 SlOFP20进化树分析 | 第33-34页 |
3.3 SlOFP20在野生型中的组织表达模式分析 | 第34-35页 |
3.4 表达载体的构建及遗传转化 | 第35-36页 |
3.4.1 SlOFP20的克隆及过表达载体的构建 | 第35页 |
3.4.2 沉默载体的构建 | 第35-36页 |
3.4.3 番茄的遗传转化 | 第36页 |
3.5 转基因株系鉴定及表型分析 | 第36-46页 |
3.5.1 转基因株系鉴定 | 第36-38页 |
3.5.2 转基因株系果实的表型及转录水平分析 | 第38-42页 |
3.5.3 转基因株系叶片的表型及转录水平分析 | 第42-44页 |
3.5.4 转基因株系根、茎、花等器官的表型分析 | 第44-46页 |
3.6 转录组数据分析 | 第46-58页 |
3.6.1 转录组测序样品选取标准 | 第46页 |
3.6.2 测序数据质量评估 | 第46-48页 |
3.6.2.1 测序错误率分布检查 | 第46-47页 |
3.6.2.2 测序数据过滤 | 第47页 |
3.6.2.3 测序数据质量情况汇总 | 第47-48页 |
3.6.3 差异基因Venn图 | 第48-49页 |
3.6.4 Gene Ontology功能富集分析 | 第49-54页 |
3.6.5 表达差异基因的KEGG富集分析 | 第54-57页 |
3.6.6 番茄转基因株系中OFPs基因分析 | 第57-58页 |
4 讨论 | 第58-61页 |
4.1 SlOFP20负调控叶形和果形指数 | 第58页 |
4.2 SlOFP20参与调控植株的形态 | 第58-59页 |
4.3 SlOFP20可能影响与细胞分裂和细胞周期相关基因的表达 | 第59-61页 |
5 结论 | 第61-62页 |
6 参考文献 | 第62-73页 |
7 致谢 | 第73页 |