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番茄OFP20基因的克隆及功能初步分析

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番茄OFP20基因的克隆及功能初步分析
论文目录
 
中文摘要第1-11页
Abstract第11-13页
1 前言第13-19页
  1.1 国内外研究进展第13-18页
    1.1.1 番茄组学研究进展第13-14页
    1.1.2 番茄果实发育及果形调控基因的研究进展第14-15页
    1.1.3 其他植物中调控器官形状基因的研究进展第15-17页
    1.1.4 番茄OFP家族基因的研究进展第17-18页
  1.2 研究目的和意义第18-19页
2 材料与方法第19-32页
  2.1 实验材料第19-20页
    2.1.1 植物材料第19页
    2.1.2 菌株及质粒第19页
    2.1.3 酶及生化试剂第19页
    2.1.4 仪器设备第19页
    2.1.5 组织培养基第19-20页
  2.2 试验方法第20-32页
    2.2.1 RNA的提取方法第20页
    2.2.2 RNA反转录为cDNA第20-21页
    2.2.3 候选基因SlOFP20的克隆与序列分析第21页
    2.2.4 载体设计与构建第21-22页
      2.2.4.1 过表达载体的构建第21-22页
      2.2.4.2 沉默载体的构建第22页
    2.2.5 目的基因的回收、连接、转化第22-25页
      2.2.5.1 回收目的基因片段第22页
      2.2.5.2 连接第22-23页
      2.2.5.3 大肠杆菌感受态DH5α转化及筛选第23页
      2.2.5.4 提取质粒第23-24页
      2.2.5.5 农杆菌感受态细胞制备第24-25页
      2.2.5.6 电击法转化农杆菌第25页
    2.2.6 番茄的遗传转化第25-26页
    2.2.7 DNA提取的方法第26-27页
    2.2.8 转基因株系的验证第27页
    2.2.9 番茄SlOFP20组织表达特异性第27页
    2.2.10 叶片、果实显微结构分析第27-28页
    2.2.11 植物根系活力的测定第28页
    2.2.12 茎粗、开花节位、果实重量和种子千粒重测定第28页
    2.2.13 植株生长曲线第28页
    2.2.14 转录组测序第28-31页
      2.2.14.1 建库测序流程第28-30页
      2.2.14.2 生物信息学分析流程第30-31页
    2.2.15 生物信息学分析网站第31-32页
3 结果与分析第32-58页
  3.1 SlOFP20基因结构、亚细胞定位及启动子顺式作用元件的生物信息学分析第32-33页
  3.2 SlOFP20进化树分析第33-34页
  3.3 SlOFP20在野生型中的组织表达模式分析第34-35页
  3.4 表达载体的构建及遗传转化第35-36页
    3.4.1 SlOFP20的克隆及过表达载体的构建第35页
    3.4.2 沉默载体的构建第35-36页
    3.4.3 番茄的遗传转化第36页
  3.5 转基因株系鉴定及表型分析第36-46页
    3.5.1 转基因株系鉴定第36-38页
    3.5.2 转基因株系果实的表型及转录水平分析第38-42页
    3.5.3 转基因株系叶片的表型及转录水平分析第42-44页
    3.5.4 转基因株系根、茎、花等器官的表型分析第44-46页
  3.6 转录组数据分析第46-58页
    3.6.1 转录组测序样品选取标准第46页
    3.6.2 测序数据质量评估第46-48页
      3.6.2.1 测序错误率分布检查第46-47页
      3.6.2.2 测序数据过滤第47页
      3.6.2.3 测序数据质量情况汇总第47-48页
    3.6.3 差异基因Venn图第48-49页
    3.6.4 Gene Ontology功能富集分析第49-54页
    3.6.5 表达差异基因的KEGG富集分析第54-57页
    3.6.6 番茄转基因株系中OFPs基因分析第57-58页
4 讨论第58-61页
  4.1 SlOFP20负调控叶形和果形指数第58页
  4.2 SlOFP20参与调控植株的形态第58-59页
  4.3 SlOFP20可能影响与细胞分裂和细胞周期相关基因的表达第59-61页
5 结论第61-62页
6 参考文献第62-73页
7 致谢第73页

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