论文目录 | |
中文摘要 | 第1-10
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英文摘要 | 第10-12
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第一部分 引言 | 第12-16
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第二部分 禽(番鸭)呼肠孤病毒株S组基因序列分析 | 第16-46
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材料与方法 | 第16-22
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1 材料 | 第16-18
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· 病毒 | 第16
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· 非免疫番鸭胚 | 第16
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· 主要试剂 | 第16
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· 溶液配制 | 第16-17
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· 引物 | 第17-18
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· 主要仪器 | 第18
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2 方法 | 第18-22
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· 病毒的增殖及RNA的提取 | 第18
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· 病毒RNA反转录和PCR扩增 | 第18-19
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· PCR产物的回收与纯化 | 第19
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· PCR产物的克隆 | 第19-20
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· DRV-S组基因节段的序列测定 | 第20-21
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· DRV-S组基因节段测序结果的联机检索分析 | 第21
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· DRV-S组基因节段cDNA核苷酸、推导的氨基酸序列的比较及系统发生树的绘制 | 第21-22
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结果与分析 | 第22-41
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1 RT-PCR扩增结果 | 第22-23
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· 对YH和YJL的S组基因的RT-PCR扩增结果 | 第22
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· YH和YJL-S1基因的RT-PCR扩增 | 第22
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· YJL-S2基因的RT-PCR扩增 | 第22
页 |
· YH和YJL-S3基因的RT-PCR扩增 | 第22
页 |
· YJL-S4基因的RT-PCR扩增 | 第22
页 |
· 对YB的S组基因的RT-PCR扩增结果 | 第22-23
页 |
· YB-S1基因的RT-PCR扩增 | 第22
页 |
· YB-S2基因的RT-PCR扩增 | 第22
页 |
· YB-S3基因的RT-PCR扩增 | 第22
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· YB-S4基因的RT-PCR扩增 | 第22-23
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2 YH、YJL和YB的S组基因的阳性质粒PCR鉴定 | 第23-28
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· YH和YJL的S组基因的阳性质粒PCR鉴定 | 第23
页 |
· YH和YJL-S1基因的阳性质粒PCR鉴定 | 第23
页 |
· YJL-S2基因的阳性质粒PCR鉴定 | 第23
页 |
· YH和YJL-S3基因的阳性质粒鉴定 | 第23
页 |
· YJL-S4基因的阳性质粒PCR鉴定 | 第23
页 |
· YB的S组基因的阳性质粒PCR鉴定 | 第23-28
页 |
· YB-S1基因的阳性质粒PCR鉴定 | 第23
页 |
· YB-S2基因的阳性质粒PCR鉴定 | 第23-24
页 |
· YB-S3基因的阳性质粒PCR鉴定 | 第24
页 |
· YB-S4基因的阳性质粒PCR鉴定 | 第24-28
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3 cDNA的序列测定 | 第28-30
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· YH和YJL的S组基因cDNA的序列测定 | 第28-29
页 |
· YH、YJL-S1基因的序列测定 | 第28
页 |
· YJL-S2基因的序列测定 | 第28
页 |
· YH、YJL-S3基因的序列测定 | 第28-29
页 |
· YJL-S4基因的序列测定 | 第29
页 |
· YB的S组基因cDNA的序列测定 | 第29-30
页 |
· YB-S1基因的序列测定 | 第29
页 |
· YB-S2基因的序列测定 | 第29
页 |
· YB-S3基因的序列测定 | 第29
页 |
· YB-S4基因的序列测定 | 第29-30
页 |
4 测序结果的联机检索 | 第30
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5 DRV核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析 | 第30-37
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· 编码σA蛋白的基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析 | 第30
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· 编码σNS蛋白的基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析 | 第30-31
页 |
· 编码σB蛋白的基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析 | 第31
页 |
· 具有多顺反子基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析 | 第31-37
页 |
· YH、YJL-S1基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析 | 第31-32
页 |
· YB-S4基因核苷酸序列和推导氨基酸序列的比较分析 | 第32-37
页 |
6 DRV-S组基因系统发生树的建立 | 第37-41
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· 编码σA蛋白的基因系统发生树的建立 | 第37
页 |
· 编码σNS蛋白的基因系统发生树的建立 | 第37
页 |
· 编码σB蛋白的基因系统发生树的建立 | 第37-38
页 |
· 编码σC蛋白的基因系统发生树的建立 | 第38-41
页 |
讨论 | 第41-46
页 |
1 YJL、YH-S1和YB-S4基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性比较 | 第41-43
页 |
2 YJL-S4和YB-S2基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性比较 | 第43-44
页 |
3 YJL-S2和YB-S1基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性比较 | 第44-45
页 |
4 YH,YJL和YB-S3基因核苷酸序列和氨基酸序列同源性比较 | 第45-46
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第三部分 DRV-YB株的S3与S40RF2基因的原核表达 | 第46-57
页 |
材料与方法 | 第46-53
页 |
1 材料 | 第46-48
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· 病毒 | 第46
页 |
· 主要试剂 | 第46-47
页 |
· 溶液配制 | 第47
页 |
· 引物 | 第47-48
页 |
· 主要仪器 | 第48
页 |
2 方法 | 第48-53
页 |
· 病毒增殖 | 第48
页 |
· 病毒RNA的提取和PCR扩增 | 第48
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· PCR产物的回收、克隆及鉴定 | 第48
页 |
· 目的基因的原核表达 | 第48-51
页 |
· 表达产物σB和σC蛋白的生物学活性检测 | 第51-53
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结果与分析 | 第53-57
页 |
1 对YB的S3和S40RF2基因RT-PCR扩增结果 | 第53
页 |
· YB-S40RF2基因的RT-PCR扩增 | 第53
页 |
· YB-S3基因的RT-PCR扩增 | 第53
页 |
2 YB的S3和S40RF2基因阳性质粒PCR鉴定 | 第53-54
页 |
· YB-S40RF2基因的阳性质粒PCR鉴定 | 第53
页 |
· YB-S3基因的阳性质粒PCR鉴定 | 第53-54
页 |
3 表达产物SDS-PAGE分析和Western-blotting分析 | 第54-56
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· 诱导表达蛋白的分析 | 第54-55
页 |
· 表达产物的Western-blotting检测 | 第55-56
页 |
4 蛋白胶薄层扫描分析重组表达蛋白 | 第56-57
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讨论 | 第57-59
页 |
结论 | 第59-60
页 |
参考文献 | 第60-64
页 |
附录 | 第64-74
页 |
致谢 | 第74-75
页 |
作者简介 | 第75页 |