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ChIFN-γ调控烟草腺毛发育关键基因功能的研究

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ChIFN-γ调控烟草腺毛发育关键基因功能的研究
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-10页
缩略词表第10-12页
第一章 前言第12-22页
  1.1 干扰素的研究进展第12页
  1.2 ChIFN-γ的研究进展第12-14页
  1.3 烟草腺毛的研究进展第14-16页
    1.3.1 烟草腺毛的形态学特征第14页
    1.3.2 烟草腺毛的结构与类型第14-15页
    1.3.3 调控烟草腺毛发育相关基因的研究进展第15-16页
  1.4 调控拟南芥的表皮毛发育特异性表达的基因第16-17页
  1.5 研究蛋白质与蛋白质的相互作用的研究方法第17-20页
    1.5.1 酵母双杂交系统第18页
    1.5.2 等温滴定量热法第18-19页
    1.5.3 表面等离子共振技术第19页
    1.5.4 免疫共沉淀技术第19-20页
    1.5.5 GST-pull-down技术第20页
  1.6 本研究的目的及意义第20-22页
第二章 拟南芥的遗传与转化第22-36页
  2.1 引言第22页
  2.2 材料第22-24页
    2.2.1 菌种和植物材料第22页
    2.2.2 主要试剂第22-23页
    2.2.3 实验仪器第23页
    2.2.4 染色液和培养基的配制第23-24页
  2.3 实验方法第24-27页
    2.3.1 拟南芥的培养第24页
    2.3.2 拟南芥的遗传转化第24-25页
    2.3.3 拟南芥T1代转基因种子的筛选第25页
    2.3.4 拟南芥基因组的提取第25-26页
    2.3.5 抗性植株PCR检测第26-27页
    2.3.6 GUS组织化学染色检测抗性植株第27页
  2.4 结果与分析第27-33页
    2.4.1 抗性植株的筛选与鉴定第27-30页
    2.4.2 转基因拟南芥性状的观察第30-33页
  2.5 讨论第33-36页
第三章 ChIFN-γ与IspH、CyP71和LBM1的蛋白互作第36-80页
  3.1 引言第36-37页
  3.2 材料第37-43页
    3.2.1 细菌与质粒第37页
    3.2.2 主要实验仪器第37-38页
    3.2.3 主要试剂第38-40页
    3.2.4 试剂盒第40页
    3.2.5 酶切引物的设计第40页
    3.2.6 试剂的配置第40-43页
  3.3 实验方法第43-59页
    3.3.1 目的DNA片段的扩增第43-44页
    3.3.2 PCR产物的检测与胶回收第44-45页
    3.3.3 目的基因质粒的提取第45-46页
    3.3.4 质粒PCR检测目的基因及胶回收第46页
    3.3.5 pET28a、pET30a质粒的提取第46页
    3.3.6 pET28a、pET30a质粒的双酶切及回收第46-47页
    3.3.7 ChIFN-γ、IspH、CyP71和LBM1的双酶切及其产物回收第47-48页
    3.3.8 目的基因Ch IFN-γ、IspH、Cy P71、LBM1和表达载体的连接第48-49页
    3.3.9 感受态大肠杆菌(E.coli BL(21))的制备第49-50页
    3.3.10 连接产物的转化第50页
    3.3.11 重组质粒的鉴定第50-52页
    3.3.12 重组质粒的测序第52页
    3.3.13 重组蛋白的小量诱导表达第52-53页
    3.3.14 SDS-PAGE电泳检测目的蛋白的表达第53页
    3.3.15 重组蛋白的大量诱导表达第53-54页
    3.3.16 重组蛋白的纯化第54-56页
    3.3.17 目的蛋白的复性透析第56-57页
    3.3.18 考马斯亮蓝法测定蛋白浓度第57页
    3.3.19 Western Blot检测ChIFN-γ、IspH、CyP71、LBM1蛋白第57-58页
    3.3.20 等温滴定量热法检测蛋白间的相互作用第58-59页
  3.4 实验结果与分析第59-77页
    3.4.1 ChIFN-γ、Isp H、CyP71和LBM1基因PCR扩增第59-60页
    3.4.2 菌落PCR检测重组表达载体第60-61页
    3.4.3 质粒PCR检测重组质粒第61-62页
    3.4.4 双酶切鉴定重组质粒第62-63页
    3.4.5 重组蛋白小量诱导表达第63-64页
    3.4.6 重组蛋白的大量诱导表达第64-67页
    3.4.7 离子交换层析纯化ChIFN-γ和IspH蛋白第67-69页
    3.4.8 亲和层析纯化CyP71和LBM1蛋白第69-70页
    3.4.9 纯化蛋白的浓度测定第70-73页
    3.4.10 Western Blot检测ChIFN-γ、IspH、CyP71和LBM1蛋白第73-74页
    3.4.11 等温滴定量热仪检测蛋白互作第74-77页
  3.5 讨论第77-80页
第四章 总结与展望第80-82页
  4.1 总结第80-81页
  4.2 展望第81-82页
参考文献第82-88页
附录第88-92页
致谢第92页
在读期间参与科研项目第92页
在读期间发表文章第92-93页

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