论文目录 | |
| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 研究背景 | 第13-16页 |
| 1.1 贵州从江香猪概述 | 第13页 |
| 1.2 FoxO家族研究概述 | 第13-14页 |
| 1.3 FoxO4研究概述 | 第14-15页 |
| 1.4 AMPK家族研究概述 | 第15页 |
| 1.5 PRKAA1研究概述 | 第15-16页 |
| 2 脂肪对猪肉品质影响的概述 | 第16-20页 |
| 2.1 影响猪肉品质的候选基因 | 第16页 |
| 2.2 脂肪的分布 | 第16-17页 |
| 2.3 脂肪的合成与分解 | 第17-18页 |
| 2.4 脂肪细胞的分化 | 第18-19页 |
| 2.5 脂肪细胞分化过程中关键调控因子 | 第19-20页 |
| 2.6 脂肪代谢对猪肉品质的影响 | 第20页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 第二章 FoxO4、PRKAA1基因在从江香猪不同组织的表达分析 | 第22-32页 |
| 1 试验材料 | 第22-24页 |
| 1.1 试验动物与样品 | 第22页 |
| 1.2 试验仪器设备 | 第22-23页 |
| 1.3 试验主要试剂 | 第23-24页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第24页 |
| 2 试验方法 | 第24-28页 |
| 2.1 引物设计 | 第24-25页 |
| 2.2 总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.1 前期准备 | 第25页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.3 RNA浓度和纯度检测 | 第26页 |
| 2.3 cDNA的合成 | 第26页 |
| 2.4 PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.5 qRT-PCR检测 | 第27页 |
| 2.6 数据分析 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-31页 |
| 3.1 总RNA的纯度检测 | 第28页 |
| 3.2 基因克隆 | 第28-29页 |
| 3.3 qRT-PCR结果分析 | 第29-31页 |
| 3.3.1 qRT-PCR产物特异性分析 | 第29-30页 |
| 3.3.2 FoxO4、PRKAA1基因在从江香猪不同组织的qRT-PCR分析 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31页 |
| 5 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 FoxO4、PRKAA1基因的克隆及真核表达载体的构建 | 第32-44页 |
| 1 试验材料 | 第32-33页 |
| 1.1 样品、菌株、载体 | 第32页 |
| 1.2 试验仪器设备 | 第32页 |
| 1.3 试验主要试剂 | 第32页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第32-33页 |
| 2 试验方法 | 第33-37页 |
| 2.1 FoxO4、PRKAA1基因的克隆 | 第33-35页 |
| 2.1.1 总RNA的提取和cDNA合成 | 第33页 |
| 2.1.2 克隆FoxO4、PRKAA1基因 | 第33-35页 |
| 2.2 FoxO4、PRKAA1基因的T克隆 | 第35-36页 |
| 2.2.1 FoxO4、PRKAA1基因扩增产物的回收纯化 | 第35页 |
| 2.2.2 FoxO4、PRKAA1基因与T载体的连接 | 第35页 |
| 2.2.3 连接产物的转化 | 第35页 |
| 2.2.4 pMD-18T-FoxO4、pMD-18T-PRKAA1的菌液PCR | 第35-36页 |
| 2.2.5 pMD-18T-FoxO4、pMD-18T-PRKAA1的双酶切 | 第36页 |
| 2.2.6 菌种保存 | 第36页 |
| 2.3 pEGFP-N3-FoxO4、pEGFP-N3-PRKAA1的构建 | 第36-37页 |
| 2.3.1 质粒双酶切的胶回收产物纯化 | 第36页 |
| 2.3.2 DNA的连接 | 第36-37页 |
| 2.3.3 连接产物的转化 | 第37页 |
| 2.3.4 pEGFP-N3-FoxO4、pEGFP-N3-PRKAA1的菌液PCR | 第37页 |
| 2.3.5 pEGFP-N3-FoxO4、pEGFP-N3-PRKAA1的双酶切 | 第37页 |
| 2.3.6 菌种保存 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-42页 |
| 3.1 FoxO4、PRKAA1基因的克隆结果 | 第37-38页 |
| 3.2 FoxO4、PRKAA1基因T克隆的鉴定 | 第38-40页 |
| 3.3 pEGFP-N3-FoxO4、pEGFP-N3-PRKAA1的菌液PCR鉴定 | 第40页 |
| 3.4 pEGFP-N3-FoxO4、pEGFP-N3-PRKAA1的双酶切鉴定 | 第40-42页 |
| 3.5 pEGFP-N3-FoxO4、pEGFP-N3-PRKAA1的测序鉴定 | 第42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 5 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 细胞培养、诱导分化及相关基因的表达 | 第44-56页 |
| 1 试验材料 | 第44-46页 |
| 1.1 试验动物 | 第44页 |
| 1.2 试验仪器设备 | 第44页 |
| 1.3 试验主要试剂 | 第44页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第44-46页 |
| 2 试验方法 | 第46-47页 |
| 2.1 肌内和皮下脂肪前体细胞的培养 | 第46-47页 |
| 2.1.1 原代培养 | 第46页 |
| 2.1.2 传代培养 | 第46页 |
| 2.1.3 生长曲线 | 第46-47页 |
| 2.1.4 诱导分化 | 第47页 |
| 2.1.5 脂肪含量的测定 | 第47页 |
| 2.1.6 细胞分化相关基因时序表达 | 第47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-53页 |
| 3.1 形态学观察 | 第47-49页 |
| 3.2 生长曲线 | 第49页 |
| 3.3 诱导分化及油红O染色 | 第49-51页 |
| 3.4 脂肪含量的测定 | 第51页 |
| 3.5 细胞分化相关基因的时序表达 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 5 小结 | 第55-56页 |
| 第五章 FoxO4、PRKAA1基因对脂肪代谢影响的研究 | 第56-66页 |
| 1 试验材料 | 第56-57页 |
| 1.1 细胞 | 第56页 |
| 1.2 试验仪器设备 | 第56页 |
| 1.3 试验主要试剂 | 第56页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第56-57页 |
| 2 试验方法 | 第57-60页 |
| 2.1 重组质粒瞬时转染细胞 | 第57-59页 |
| 2.1.1 无内毒素质粒的提取 | 第57-58页 |
| 2.1.2 细胞的复苏及培养 | 第58页 |
| 2.1.3 瞬时转染 | 第58-59页 |
| 2.2 FoxO4、PRKAA1过表达对脂代谢相关基因的表达影响 | 第59-60页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第59页 |
| 2.2.2 细胞的RNA提取 | 第59-60页 |
| 2.2.3 cDNA的合成 | 第60页 |
| 2.2.4 qRT-PCR检测 | 第60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-64页 |
| 3.1 基因克隆结果 | 第60-61页 |
| 3.2 pEGFP-N3-FoxO4在肌内和皮下脂肪前体细胞的瞬时转染 | 第61-62页 |
| 3.3 pEGFP-N3-PRKAA1在肌内和皮下脂肪前体细胞的瞬时转染 | 第62页 |
| 3.4 FoxO4、PRKAA1上调对脂代谢相关基因的表达影响 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-65页 |
| 5 小结 | 第65-66页 |
| 第六章 小结与展望 | 第66-67页 |
| 1 小结 | 第66页 |
| 2 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 附录Ⅰ | 第75-76页 |
| 附录Ⅱ | 第76-77页 |
