论文目录 | |
| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 上篇 文献综述 | 第12-43页 |
| 第一章 病原相关模式分子概述 | 第13-31页 |
| 1 细菌中的病原相关模式分子 | 第16-18页 |
| 1.1 鞭毛蛋白(Flagellin)和延伸因子(Elongation factor Tu) | 第16-17页 |
| 1.2 肽聚糖(PGN)和脂多糖(LPS) | 第17-18页 |
| 2 真菌中的病原相关模式分子 | 第18-19页 |
| 2.1 木聚糖酶(EIX) | 第18页 |
| 2.2 几丁质(Chitin) | 第18-19页 |
| 3 卵菌中的病原相关模式分子 | 第19-23页 |
| 3.1 依赖于钙离子的谷氨酰胺转移酶(GP42) | 第19页 |
| 3.2 结合纤维素的激发子凝集素(CBEL) | 第19页 |
| 3.3 激发素(Elicitins) | 第19-20页 |
| 3.4 富含半胱氨酸的蛋白(SCR) | 第20页 |
| 3.5 坏死和乙烯诱导肽(NLP) | 第20-23页 |
| 参考文献 | 第23-31页 |
| 第二章 病原相关模式分子(PAMPs)免疫活性和毒性功能研究进展 | 第31-43页 |
| 1 病原相关模式分子免疫活性的研究进展 | 第31-37页 |
| 1.1 膜受体蛋白对PAMPs的识别 | 第31-35页 |
| 1.1.1 受体激酶(RLKs)对PAMPs的识别 | 第33-34页 |
| 1.1.2 受体蛋白(RLPs)对PAMPs的识别 | 第34-35页 |
| 1.2 BAK1和SOBIR1是防卫信号传导的中心枢纽 | 第35-36页 |
| 1.3 病原相关模式分子触发的免疫反应 | 第36-37页 |
| 2 PAMPs毒性功能的研究进展 | 第37-38页 |
| 2.1 PAMPs参与病原菌生长发育和适应环境的过程 | 第37-38页 |
| 2.2 PAMPs参与病原菌的侵染过程 | 第38页 |
| 3 展望 | 第38-39页 |
| 参考文献 | 第39-43页 |
| 下篇 研究内容 | 第43-85页 |
| 第一章 卵菌GH12蛋白的免疫活性分析 | 第45-67页 |
| 1 材料与方法 | 第47-53页 |
| 1.1 供试菌株的保存与植物材料的培养 | 第47页 |
| 1.2 基因组DNA的提取 | 第47页 |
| 1.3 马铃薯X病毒载体pgR107 | 第47-48页 |
| 1.4 病原相关模式分子XEG1及其同源蛋白基因的克隆 | 第48页 |
| 1.5 农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第48-49页 |
| 1.5.1 农杆菌电击感受态细胞的制备 | 第48页 |
| 1.5.2 农杆菌电击感受态的转化 | 第48-49页 |
| 1.6 农杆菌介导的烟草瞬时转化 | 第49页 |
| 1.7 烟草中目的蛋白的提取与检测 | 第49-50页 |
| 1.7.1 烟草总蛋白的提取 | 第49-50页 |
| 1.7.2 蛋白质SDS-PAGE电泳和Western Blot | 第50页 |
| 1.8 烟草RNA的提取 | 第50页 |
| 1.9 RNA逆转录 | 第50-51页 |
| 1.10 Real Time PCR | 第51-52页 |
| 1.11 DAB染色检测活性氧的积累 | 第52页 |
| 1.12 苯胺蓝染色观察胼胝质的积累 | 第52-53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-63页 |
| 2.1 XEG1能在烟草上激发过敏性坏死反应 | 第53页 |
| 2.2 XEG1能诱发烟草防卫基因的表达 | 第53-54页 |
| 2.3 XEG1能诱发防卫相关物质的积累 | 第54-55页 |
| 2.4 卵菌GH12蛋白的进化分析 | 第55-58页 |
| 2.5 卵菌GH12蛋白激发过敏性坏死反应的活性分析 | 第58-62页 |
| 2.5.1 大豆疫霉GH12蛋白激发过敏性坏死反应的活性分析 | 第58-59页 |
| 2.5.2 辣椒疫霉GH12蛋白激发过敏性坏死反应的活性分析 | 第59页 |
| 2.5.3 烟草疫霉GH12蛋白激发过敏性坏死反应的活性分析 | 第59-60页 |
| 2.5.4 致病疫霉GH12蛋白激发过敏性坏死反应的活性分析 | 第60-61页 |
| 2.5.5 寄生霜霉GH12蛋白激发过敏性坏死反应的活性分析 | 第61-62页 |
| 2.6 具有激发坏死反应活性的GH12蛋白在卵菌中的分布 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 第二章 PsXEG1毒性机制的分析 | 第67-85页 |
| 1 材料与方法 | 第68-74页 |
| 1.1 供试菌株的保存与植物材料的培养 | 第68-69页 |
| 1.2 培养基的制备 | 第69页 |
| 1.3 载体的构建 | 第69-71页 |
| 1.3.1 hSpCas9表达载体 | 第69-70页 |
| 1.3.2 sgRNA载体构建 | 第70-71页 |
| 1.3.3 携带同源重组模板的环状载体pBS-SK+ | 第71页 |
| 1.4 大豆疫霉遗传稳定转化 | 第71页 |
| 1.5 转化子的筛选 | 第71-73页 |
| 1.5.1 荧光筛选转化子 | 第71-72页 |
| 1.5.2 CTAB-SDS法提取荧光转化子基因组 | 第72页 |
| 1.5.3 通过PCR和基因测序的方法来验证目的基因的敲除和替换 | 第72-73页 |
| 1.6 转化子的致病性测定 | 第73-74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-81页 |
| 2.1 PsXEG1基因中sgRNA序列的筛选分析 | 第74-75页 |
| 2.2 同源重组载体的构建 | 第75-76页 |
| 2.3 PsXEG1敲除转化子的获得 | 第76-77页 |
| 2.4 PsXEG1替换为GUS基因转化子的获得 | 第77-78页 |
| 2.5 PsXEG1替换为酶活突变体PsXEG1~(E136D&E222D)转化子的获得 | 第78-79页 |
| 2.6 PsXEG1的敲除和替换不影响大豆疫霉的生长 | 第79-80页 |
| 2.7 PsXEG1敲除转化子的致病力减弱 | 第80页 |
| 2.8 PsXEG1的毒性来源于其糖基水解酶活性 | 第80-81页 |
| 3 讨论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-85页 |
| 附录 | 第85-89页 |
| 攻读硕士期间发表的研究论文 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
