论文目录 | |
| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第14-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-36页 |
| 第一章 棉花黄萎病的研究进展 | 第16-24页 |
| 1 棉花黄萎病菌 | 第16-17页 |
| 2 黄萎病菌的侵染过程 | 第17-18页 |
| 3 黄萎病致病机制 | 第18-20页 |
| 3.1 导管堵塞 | 第18页 |
| 3.2 过度防御反应 | 第18页 |
| 3.3 黄萎病菌毒素 | 第18-20页 |
| 4 棉花黄萎病抗性机制 | 第20-22页 |
| 4.1 组织耐受性 | 第20页 |
| 4.2 生理生化抗性 | 第20-21页 |
| 4.3 抗病分子机制 | 第21-22页 |
| 5 棉花黄萎病抗性鉴定方法 | 第22-24页 |
| 第二章 转录组学和磷酸蛋白质组学的研究进展 | 第24-36页 |
| 1 转录组研究技术 | 第25-26页 |
| 1.1 基因芯片 | 第25页 |
| 1.2 SAGE与MPSS技术 | 第25-26页 |
| 1.3 RNA-seq | 第26页 |
| 2 棉花黄萎病转录组学研究进展 | 第26-27页 |
| 3 磷酸蛋白质组学研究技术 | 第27-33页 |
| 3.1 磷酸化蛋白质及磷酸肽的分离纯化 | 第28-31页 |
| 3.1.1 基于凝胶的磷酸化蛋白质检测 | 第28-29页 |
| 3.1.2 磷酸肽富集方法 | 第29-31页 |
| 3.1.2.1 固相金属离子亲和层析法 | 第29-30页 |
| 3.1.2.2 金属氧化物亲和层析法 | 第30-31页 |
| 3.1.2.3 离子交换色谱法 | 第31页 |
| 3.2 蛋白质及肽段定量方法 | 第31-32页 |
| 3.3 磷酸肽及磷酸化位点的鉴定 | 第32-33页 |
| 4 棉花黄萎病磷酸蛋白质组学研究进展 | 第33-36页 |
| 本研究的目的意义 | 第36-38页 |
| 第二部分 研究报告 | 第38-118页 |
| 第三章 利用GFP标记的大丽轮枝菌研究其对棉花的侵染过程 | 第38-56页 |
| 1 材料与方法 | 第38-44页 |
| 1.1 试验材料 | 第38-39页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第38-39页 |
| 1.1.2 菌株、质粒、试剂及引物 | 第39页 |
| 1.2 试验方法 | 第39-44页 |
| 1.2.1 农杆菌感受态的制备转化 | 第39-40页 |
| 1.2.3 农杆菌介导大丽轮枝菌的遗传转化 | 第40-41页 |
| 1.2.4 转化子的筛选与验证 | 第41-43页 |
| 1.2.4.1 PCR检测 | 第41-42页 |
| 1.2.4.2 菌落形态观察及荧光检测 | 第42页 |
| 1.2.4.3 致病力鉴定 | 第42-43页 |
| 1.2.5 棉花黄萎病抗性鉴定 | 第43-44页 |
| 1.2.5.1 培养基定量接种 | 第43-44页 |
| 1.2.5.2 棉苗发病症状的观察与统计 | 第44页 |
| 1.2.6 大丽轮枝菌侵染过程的荧光观察 | 第44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-52页 |
| 2.1 GFP标记的大丽轮枝菌的获得及验证 | 第44-48页 |
| 2.2 TM-1和海7124对大丽轮枝菌的抗性分析 | 第48-50页 |
| 2.3 Vd991-GFP-2在棉苗植株内侵染进程 | 第50-52页 |
| 3 讨论 | 第52-56页 |
| 3.1 转化子荧光信号强度、菌落形态及致病力分析 | 第52-53页 |
| 3.2 大丽轮枝菌在陆地棉及海岛棉中的侵染过程 | 第53-56页 |
| 第四章 大丽轮枝菌侵染初期陆地棉TM-1的转录组学分析 | 第56-80页 |
| 1 材料与方法 | 第56-61页 |
| 1.1 试验材料 | 第56-57页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第56页 |
| 1.1.2 菌株、试剂 | 第56-57页 |
| 1.2 试验方法 | 第57-61页 |
| 1.2.1 植物样品处理 | 第57页 |
| 1.2.2 棉花根茎总RNA的提取 | 第57-58页 |
| 1.2.3 RNA测序 | 第58-59页 |
| 1.2.4 qRT-PCR验证 | 第59-60页 |
| 1.2.4.1 DNaseI消化除总RNA中DNA污染 | 第59页 |
| 1.2.4.2 反转录反应 | 第59-60页 |
| 1.2.4.3 qRT-PCR | 第60页 |
| 1.2.5 数据分析 | 第60-61页 |
| 1.2.6 生物信息学分析 | 第61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-75页 |
| 2.1 棉花根茎总RNA的提取 | 第61-62页 |
| 2.2 转录组测序质量评估 | 第62-65页 |
| 2.3 转录组差异表达分析 | 第65-75页 |
| 2.3.1 表达差异基因及qRT-PCR验证 | 第65-67页 |
| 2.3.2 差异基因功能显著性富集分析 | 第67-75页 |
| 3 讨论 | 第75-80页 |
| 3.1 木质素合成及苯丙氨酸代谢途径 | 第75-76页 |
| 3.2 响应逆境激素乙烯、茉莉酸及水杨酸的基因 | 第76-77页 |
| 3.3 E3泛素连接酶 | 第77-80页 |
| 第五章 棉花根茎磷酸肽富集方法的比较 | 第80-96页 |
| 1 材料与方法 | 第80-86页 |
| 1.1 试验材料 | 第80-81页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第80页 |
| 1.1.2 试剂 | 第80-81页 |
| 1.2 试验方法 | 第81-86页 |
| 1.2.1 棉花根茎总蛋白提取 | 第81-82页 |
| 1.2.1.1 改良苯酚甲醇法 | 第81页 |
| 1.2.2.2 改良三氯乙酸-丙酮法 | 第81-82页 |
| 1.2.2 蛋白质溶解及浓度测定 | 第82页 |
| 1.2.3 蛋白质酶切成肽段 | 第82-83页 |
| 1.2.3.1 稀释酶解 | 第82页 |
| 1.2.3.2 超滤辅助制备肽段样品 | 第82-83页 |
| 1.2.4 肽段脱盐 | 第83页 |
| 1.2.5 Ti~(4+)-IMAC微球体的制备 | 第83-84页 |
| 1.2.6 磷酸肽富集 | 第84-85页 |
| 1.2.6.1 Ti~(4+)-IMAC微球体 | 第84页 |
| 1.2.6.2 Fe~(3+)-IMAC | 第84-85页 |
| 1.2.6.3 TiO_2 | 第85页 |
| 1.2.7 LC-MS/MS质谱检测及数据库检索 | 第85-86页 |
| 2 结果与分析 | 第86-92页 |
| 2.1 Ti~(4+)-IMAC微球体的制备 | 第86-87页 |
| 2.2 不同方法富集磷酸肽的结果及比较 | 第87-92页 |
| 3 讨论 | 第92-96页 |
| 3.0 磷酸肽富集方法 | 第92-93页 |
| 3.1 不同方法对棉花根茎磷酸肽富集效果的比较 | 第93-94页 |
| 3.2 影响TiO_2磷酸肽富集效率的因素 | 第94-96页 |
| 第六章 大丽轮枝菌侵染初期陆地棉TM-1的磷酸蛋白质组学分析 | 第96-118页 |
| 1 材料与方法 | 第96-100页 |
| 1.1 试验材料 | 第96-97页 |
| 1.1.1 植物材料 | 第96-97页 |
| 1.1.2 菌株、试剂 | 第97页 |
| 1.2 试验方法 | 第97-100页 |
| 1.2.1 植物样品处理 | 第97页 |
| 1.2.2 磷酸肽样品制备 | 第97-98页 |
| 1.2.2.1 根茎总蛋白提取 | 第97页 |
| 1.2.2.2 超滤辅助制备肽段样品 | 第97页 |
| 1.2.2.3 磷酸肽富集 | 第97页 |
| 1.2.2.4 磷酸肽脱盐 | 第97-98页 |
| 1.2.3 质谱分析 | 第98-99页 |
| 1.2.3.1 毛细管高效液相色谱 | 第98页 |
| 1.2.3.2 质谱鉴定 | 第98-99页 |
| 1.2.4 数据分析 | 第99页 |
| 1.2.5 生物信息学分析 | 第99-100页 |
| 2 结果与分析 | 第100-115页 |
| 2.1 蛋白质和肽段定量 | 第100页 |
| 2.2 磷酸肽鉴定 | 第100-101页 |
| 2.3 磷酸化位点Motif分析 | 第101-103页 |
| 2.4 差异磷酸化蛋白质的筛选及分析 | 第103-115页 |
| 3 讨论 | 第115-118页 |
| 3.1 蛋白质可逆磷酸化与脱落酸信号转导 | 第115页 |
| 3.2 E3泛素连接酶及其介导的蛋白质降解 | 第115-116页 |
| 3.3 植物受体蛋白的磷酸化 | 第116-118页 |
| 全文结论 | 第118-120页 |
| 创新点 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-132页 |
| 附录 | 第132-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
