猪流行性腹泻病毒传统毒株和变异毒株PCR鉴别诊断方法的建立与应用 |
论文目录 | | | 摘要 | 第1-10页 | | ABSTRACT | 第10-12页 | | 第一章 猪流行性腹泻病毒研究进展 | 第12-32页 | | 1 病原概述 | 第12-16页 | | 1.1 病毒分类 | 第12-13页 | | 1.2 形态结构 | 第13页 | | 1.3 理化特性 | 第13页 | | 1.4 细胞培养特性 | 第13-14页 | | 1.5 病毒蛋白与功能 | 第14-16页 | | 1.5.1 复制酶多聚蛋白 | 第14页 | | 1.5.2 ORF3蛋白 | 第14-15页 | | 1.5.3 S蛋白 | 第15页 | | 1.5.4 M蛋白 | 第15页 | | 1.5.5 E蛋白 | 第15-16页 | | 1.5.6 N蛋白 | 第16页 | | 2 流行病学 | 第16-17页 | | 3 临床症状及病理变化 | 第17页 | | 4 诊断 | 第17-21页 | | 4.1 病毒分离与鉴定 | 第17-18页 | | 4.2 PCR方法 | 第18-19页 | | 4.2.1 RT-PCR | 第18页 | | 4.2.2 荧光定量PCR | 第18页 | | 4.2.3 环介导恒温扩增 | 第18-19页 | | 4.3 微量血清中和试验 | 第19页 | | 4.4 免疫电镜法 | 第19页 | | 4.5 免疫组化技术 | 第19页 | | 4.6 免疫荧光技术 | 第19-20页 | | 4.7 酶联免疫吸附试验(ELISA法) | 第20-21页 | | 4.7.1 双抗体夹心ELISA | 第20页 | | 4.7.2 竞争阻断ELISA | 第20页 | | 4.7.3 间接ELISA | 第20页 | | 4.7.4 斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA) | 第20-21页 | | 5 防控 | 第21页 | | 5.1 加强词养管理 | 第21页 | | 5.2 返饲治疗 | 第21页 | | 5.3 抗体治疗 | 第21页 | | 6 疫苗研究 | 第21-24页 | | 6.1 PED灭活疫苗 | 第22页 | | 6.2 PED弱毒苗 | 第22页 | | 6.3 乳酸杆菌疫苗 | 第22-23页 | | 6.4 转基因植物疫苗 | 第23-24页 | | 参考文献 | 第24-32页 | | 第二章 荧光定量PCR的研究进展 | 第32-36页 | | 1 荧光定量PCR的原理 | 第32页 | | 2 荧光定量PCR的分类 | 第32-34页 | | 2.1 水解探针法 | 第33-34页 | | 2.2 荧光染料法 | 第34页 | | 3 实时荧光定量PCR技术在动物疫病诊断上的应用 | 第34-35页 | | 参考文献 | 第35-36页 | | 第三章 PEDV传统毒株和变异毒株PCR鉴别检测方法的建立 | 第36-56页 | | 1 材料和方法 | 第37-44页 | | 1.1 病料与毒株 | 第37页 | | 1.2 试剂及仪器 | 第37页 | | 1.3 引物和探针 | 第37-38页 | | 1.4 变异毒株和传统毒株阳性模板的制备 | 第38-42页 | | 1.4.1 病料处理及RNA提取 | 第38-39页 | | 1.4.2 反转录 | 第39页 | | 1.4.3 PCR扩增 | 第39-40页 | | 1.4.4 核酸胶回收 | 第40页 | | 1.4.5 重组质粒的构建 | 第40-41页 | | 1.4.6 感受态的制备与转化 | 第41页 | | 1.4.7 重组质粒的鉴定 | 第41-42页 | | 1.5 Real-time PCR方法的建立 | 第42-43页 | | 1.5.1 Real-time PCR体系优化 | 第42页 | | 1.5.2 Real-time PCR特异性试验 | 第42-43页 | | 1.5.3 Real-time PCR敏感性试验及标准曲线建立 | 第43页 | | 1.5.4 Real-time PCR重复性试验 | 第43页 | | 1.6 常规RT-PCR方法建立 | 第43-44页 | | 1.6.1 常规RT-PCR方法优化 | 第43页 | | 1.6.2 常规RT-PCR特异性试验 | 第43页 | | 1.6.3 常规RT-PCR敏感性试验 | 第43页 | | 1.6.4 常规RT-PCR重复性试验 | 第43-44页 | | 2 实验结果 | 第44-52页 | | 2.1 阳性模板的制备 | 第44-45页 | | 2.1.1 目的片段的扩增 | 第44页 | | 2.1.2 重组质粒鉴定 | 第44-45页 | | 2.1.3 质粒的稀释 | 第45页 | | 2.2 Real-time PCR方法的建立 | 第45-50页 | | 2.2.1 最佳反应条件 | 第45页 | | 2.2.2 Real-time PCR特异性试验 | 第45-47页 | | 2.2.3 Real-time PCR敏感性试验及标准曲线的建立 | 第47-48页 | | 2.2.4 Real-time PCR重复性试验 | 第48-50页 | | 2.3 常规RT-PCR方法的建立 | 第50-52页 | | 2.3.1 常规RT-PCR方法优化 | 第50页 | | 2.3.2 常规RT-PCR特异性试验 | 第50-51页 | | 2.3.3 常规RT-PCR敏感性试验 | 第51页 | | 2.3.4 常规RT-PCR重复性试验 | 第51-52页 | | 3 讨论 | 第52-54页 | | 参考文献 | 第54-56页 | | 第四章 两种PCR方法的临床应用 | 第56-64页 | | 1 材料与方法 | 第56-59页 | | 1.1 病料 | 第56页 | | 1.2 试剂和仪器 | 第56页 | | 1.3 病料处理及RNA的提取 | 第56-57页 | | 1.4 RNA反转录 | 第57页 | | 1.5 常规RT-PCR检测病料 | 第57-58页 | | 1.6 real-time PCR检测病料 | 第58页 | | 1.7 两种PCR检测方法结果对比分析 | 第58-59页 | | 2 实验结果 | 第59-61页 | | 2.1 常规RT-PCR检测结果 | 第59页 | | 2.2 Real-time PCR检测结果 | 第59-60页 | | 2.3 两种检测方法结果对比 | 第60-61页 | | 3 讨论 | 第61-62页 | | 参考文献 | 第62-64页 | | 全文总结 | 第64-66页 | | 致谢 | 第66页 |
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