论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7
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| Abstract | 第7-11
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| 第一章 综述 | 第11-18
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| · 白藜芦醇 | 第11-15
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| · 生化特性及其在植物中的分布与存在形式 | 第11
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| · 生物合成途径 | 第11-12
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| · 作为植物雌激素而起到预防癌症的作用 | 第12-13
页 |
| · 调节癌症第一、二阶段的酶 | 第13
页 |
| · 保护心血管系统 | 第13-14
页 |
| · 白藜芦醇与炎症 | 第14-15
页 |
| · 白藜芦醇合酶 | 第15-18
页 |
| · 白藜芦醇合酶的酶学性质 | 第15
页 |
| · 白藜芦醇合酶与查尔酮合酶 | 第15-16
页 |
| · 白藜芦醇合酶基因的诱导表达 | 第16
页 |
| · 白藜芦醇合酶基因的转基因研究 | 第16-18
页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-27
页 |
| · 材料 | 第18-19
页 |
| · 方法 | 第19-27
页 |
| · 基本的实验方法 | 第19
页 |
| · RNA的提取(CTAB法结合酸酚、高盐溶液与Trizol) | 第19
页 |
| · cDNA第一条链的合成 | 第19-20
页 |
| · Gene Race法克隆全长基因 | 第20-21
页 |
| · Takara公司的pMD-18T载体亚克隆 | 第21
页 |
| · 百泰克公司质粒提取试剂盒 | 第21-22
页 |
| · 百泰克公司DNA片段的回收 | 第22
页 |
| · 粘末端PCR法进行基因克隆 | 第22-23
页 |
| · IPTG诱导表达 | 第23
页 |
| · 蛋白的提取 | 第23
页 |
| · 镍柱纯化目标蛋白 | 第23-24
页 |
| · 蛋白浓缩及分子筛纯化 | 第24
页 |
| · SDS-PAGE电泳 | 第24
页 |
| · 虎杖基因组DNA的提取 | 第24-25
页 |
| · 农杆菌感受态细胞的制备: | 第25
页 |
| · 农杆菌感受态细胞的转化: | 第25
页 |
| · 含目的基因的农杆菌的鉴定 | 第25
页 |
| · 根癌农杆菌介导pCAMBIA3301转化烟草 | 第25
页 |
| · Trizol法提取烟草RNA | 第25-26
页 |
| · 用Promega的DNase处理所提取的RNA | 第26
页 |
| · 白藜芦醇的提取 | 第26
页 |
| · 色谱分析 | 第26-27
页 |
| 第三章 结果与分析 | 第27-52
页 |
| · 虎杖RS基因全长cDNA的克隆与测序分析 | 第27-34
页 |
| · RT-PCR方法克隆虎杖RS基因同源片断 | 第27-28
页 |
| · 克隆虎杖RS基因的3’末端: | 第28-29
页 |
| · Gene Race方法克隆基因5’末端 | 第29
页 |
| · 全长序列 | 第29-32
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| · 与来自花生、葡萄、蓼科大黄属的RS基因以及查尔酮查尔酮合酶基因进行蛋白序列比对 | 第32-34
页 |
| · 虎杖基因组DNA中白藜芦醇合酶基因同源序列的克隆与分析 | 第34-40
页 |
| · 扩增起始密码子与终止密码子之间的序列 | 第34-35
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| · 从虎杖基因组DNA中克隆到比全长编码区缺失了72bp的序列 | 第35-38
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| · 从虎杖基因组DNA中克隆到了含有全长编码区的序列 | 第38-39
页 |
| · 从虎杖基因组DNA中克隆到含有两个内含子的序列 | 第39-40
页 |
| · PNRS、PCRS、PCRS11基因的原核表达 | 第40-44
页 |
| · 将PNRS、PCRS、PCRS11三个基因克隆到pET22B上 | 第40-43
页 |
| · 进行诱导表达、纯化与鉴定 | 第43-44
页 |
| · 白藜芦醇合酶基因的植物表达 | 第44-51
页 |
| · 利用T载体pMD-18T进行亚克隆 | 第44-45
页 |
| · 植物表达载体的构建 | 第45-47
页 |
| · 烟草的遗传转化 | 第47-48
页 |
| · PCR法检测转基因烟草植株 | 第48-49
页 |
| · RT-PCR法检测转基因烟草植株 | 第49-50
页 |
| · HPLC法检测转基因烟草中白藜芦醇的含量 | 第50-51
页 |
| · 讨论 | 第51-52
页 |
| 第四章 结论 | 第52-53
页 |
| · 基因克隆 | 第52
页 |
| · 原核表达 | 第52
页 |
| · 植物表达 | 第52-53
页 |
| 参考文献 | 第53-58
页 |
| 致谢 | 第58-59
页 |
| 作者简历 | 第59页 |
