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猪嵴病毒RPA快速诊断方法的建立和应用

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猪嵴病毒RPA快速诊断方法的建立和应用
论文目录
 
摘要第1-8页
SUMMARY第8-10页
英文缩略表第10-11页
第一章 文献综述第11-17页
1 嵴病毒的发现第11页
2 猪嵴病毒的研究进展第11-14页
  2.1 猪嵴病毒的形态学和基因组结构第11-12页
  2.2 猪嵴病毒的理化特性第12页
  2.3 猪嵴病毒的流行情况第12-13页
    2.3.1 猪嵴病毒的国际流行情况第12页
    2.3.2 猪嵴病毒的国内流行情况第12-13页
  2.4 猪嵴病毒的诊断方法第13页
    2.4.1 病毒的分离培养第13页
    2.4.2 电镜技术第13页
    2.4.3 分子生物学方法第13页
  2.5 猪嵴病毒的防控措施第13-14页
  2.6 猪嵴病毒的研究现状与展望第14页
3 重组酶聚合酶扩增的研究现状第14-16页
  3.1 RPA技术原理第15页
  3.2 BasicRPA的技术特点第15页
  3.3 LF-RPA的技术特点第15-16页
  3.4 RPA技术的实际应用第16页
4 本研究的目的和意义第16-17页
第二章 猪嵴病毒阳性标准品制备及BASICRPA快速诊断方法的建立第17-30页
1 试验材料第17-18页
  1.1 病毒毒株、细胞及质粒第17页
  1.2 主要试剂第17-18页
  1.3 主要仪器及耗材第18页
2 试验方法第18-24页
  2.1 引物设计第18页
  2.2 病毒RNA的提取第18-19页
  2.3 阳性标准品的制备第19-21页
    2.3.1 重组质粒pMD20-T-AH6的构建第19-21页
  2.4 重组质粒pMD20-T-AH6的提取第21页
  2.5 重组质粒pMD20-T-AH6的鉴定第21-22页
  2.6 质粒拷贝数的计算第22页
  2.7 BasicRPA反应体系和反应条件的建立第22页
  2.8 BasicRPA反应产物的纯化第22-23页
  2.9 敏感性试验第23页
  2.10 特异性试验第23页
  2.11 BasicRPA反应温度的优化第23页
  2.12 BasicRPA反应时间的优化第23页
  2.13 重复性试验第23-24页
3 结果与分析第24-28页
  3.1 重组质粒pMD20-T-AH6的双酶切鉴定第24页
  3.2 敏感性试验第24-25页
    3.2.1 PKV阳性标准品BasicRPA反应的灵敏性第24-25页
    3.2.2 PKV阳性标准品RT-PCR反应的灵敏性第25页
  3.3 特异性试验第25-26页
  3.4 BasicRPA反应温度的优化第26页
  3.5 BasicRPA反应时间的优化第26-27页
  3.6 重复性试验第27-28页
    3.6.1 批间重复性试验第27页
    3.6.2 批内重复性试验第27-28页
4 讨论第28-30页
第三章 猪嵴病毒LF-RPA快速诊断方法的建立第30-39页
1 试验材料第30页
  1.1 病毒毒株、细胞及质粒第30页
  1.2 限制性内切酶及其他试剂第30页
  1.3 主要仪器和设备第30页
2 试验方法第30-33页
  2.1 引物与探针设计第30-31页
  2.2 病毒RNA的提取第31页
  2.3 阳性标准品的制备第31页
    2.3.1 重组质粒pMD20-T-AH6的构建第31页
  2.4 重组质粒pMD20-T-AH6的提取第31页
  2.5 重组质粒pMD20-T-AH6的鉴定第31-32页
  2.6 质粒拷贝数的计算第32页
  2.7 LF-RPA反应体系和反应条件的建立第32页
  2.8 敏感性试验第32-33页
  2.9 特异性试验第33页
  2.10 LF-RPA反应温度的优化第33页
  2.11 LF-RPA反应时间的优化第33页
  2.12 重复性试验第33页
3 结果与分析第33-36页
  3.1 重组质粒pMD20-T-AH6的双酶切鉴定第33页
  3.2 敏感性试验第33-34页
    3.2.1 PKV阳性标准品LF-RPA反应的灵敏性第33-34页
  3.3 LF-RPA特异性试验第34页
  3.4 LF-RPA反应温度的优化第34-35页
  3.5 LF-RPA反应时间的优化第35页
  3.6 重复性试验第35-36页
    3.6.1 批间重复性试验第35-36页
    3.6.2 批内重复性试验第36页
4 讨论第36-39页
第四章 猪嵴病毒RPA检测方法的临床应用第39-43页
1 试验材料第39页
  1.1 临床样本第39页
  1.2 试剂及仪器第39页
2 检测方法第39-40页
  2.1 样本处理第39页
  2.2 RNA提取及反转录第39页
  2.3 RPA反应第39页
  2.4 BasicRPA产物电泳检测第39-40页
  2.5 LF-RPA检测第40页
3 结果第40-42页
4 讨论第42-43页
结论第43-44页
参考文献第44-51页
致谢第51-53页
导师简介第53-54页
作者简历第54-55页

本篇论文共55页,点击这进入下载页面
 
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