论文目录 | |
| 摘要 | 第1-3页 |
| ABSTRACT | 第3-5页 |
| 缩略词 | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1 抗旱性研究 | 第10-11页 |
| 1.1.1 植物抗旱性 | 第10页 |
| 1.1.2 苹果抗旱性 | 第10-11页 |
| 1.2 植物抗逆相关基因 | 第11-14页 |
| 1.2.1 功能基因 | 第11-13页 |
| 1.2.2 转录因子 | 第13-14页 |
| 1.3 植物遗传转化的方法 | 第14-15页 |
| 1.3.1 直接转化法 | 第14页 |
| 1.3.2 间接转化法 | 第14-15页 |
| 1.4 拟南芥遗传转化 | 第15-16页 |
| 1.5 选题依据与意义 | 第16页 |
| 1.6 技术路线图 | 第16-17页 |
| 第二章 苹果TFIIE、ACBP4、MAP70-1基因的克隆与表达分析 | 第17-41页 |
| 2.1 材料 | 第17页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第17页 |
| 2.1.2 菌株、载体和试剂 | 第17页 |
| 2.2 方法 | 第17-24页 |
| 2.2.1 试验处理 | 第17-18页 |
| 2.2.2 引物设计 | 第18-19页 |
| 2.2.3 试管苗培养及RNA提取 | 第19页 |
| 2.2.4 cDNA第一链的合成 | 第19-20页 |
| 2.2.5 苹果TFIIE、ACBP4、MAP70-1基因的克隆 | 第20-21页 |
| 2.2.6 PCR扩增产物的纯化和回收 | 第21页 |
| 2.2.7 回收产物的连接与转化 | 第21-22页 |
| 2.2.8 菌液PCR鉴定及菌液测序 | 第22-23页 |
| 2.2.9 荧光定量PCR分析 | 第23-24页 |
| 2.2.10 同源性比对及系统进化树构建 | 第24页 |
| 2.2.11 生物信息学分析 | 第24页 |
| 2.2.12 数据分析 | 第24页 |
| 2.3 结果分析 | 第24-39页 |
| 2.3.1 苹果TFIIE、ACBP4、MAP70-1基因的克隆 | 第24-25页 |
| 2.3.2 苹果TFIIE、ACBP4、MAP70-1基因的序列分析 | 第25-28页 |
| 2.3.3 同源性比对及系统进化分析 | 第28-34页 |
| 2.3.4 生物信息学分析 | 第34-38页 |
| 2.3.5 苹果TFIIE、ACBP4、MAP70-1基因在控水胁迫下的表达 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-41页 |
| 第三章 植物表达载体的构建与在拟南芥中的功能鉴定 | 第41-59页 |
| 3.1 材料 | 第41页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第41页 |
| 3.1.2 播种和移栽 | 第41页 |
| 3.1.3 菌株与载体 | 第41页 |
| 3.2 方法 | 第41-47页 |
| 3.2.1 TFIIE、ACBP4、MAP70-1基因植物表达载体的构建 | 第41-43页 |
| 3.2.2 质粒酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2.3 转化大肠杆菌TOP10感受态细胞 | 第44页 |
| 3.2.4 农杆菌感受态细胞的制备 | 第44-45页 |
| 3.2.5 植物表达载体转化农杆菌EHA105 | 第45页 |
| 3.2.6 含有重组质粒的农杆菌PCR鉴定 | 第45页 |
| 3.2.7 农杆菌菌液的准备 | 第45-46页 |
| 3.2.8 花序法侵染拟南芥 | 第46页 |
| 3.2.9 T0代种子筛选 | 第46页 |
| 3.2.10 阳性植株的筛选与检测 | 第46页 |
| 3.2.11 PEG对转基因拟南芥的处理 | 第46-47页 |
| 3.2.12 转基因拟南芥的基因表达分析 | 第47页 |
| 3.2.13 数据统计分析 | 第47页 |
| 3.3 结果分析 | 第47-57页 |
| 3.3.1 植物表达载体构建 | 第47-48页 |
| 3.3.2 植物表达载体的鉴定 | 第48-49页 |
| 3.3.3 重组质粒转化农杆菌的PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 3.3.4 拟南芥T_1代抗性植株筛选 | 第50-51页 |
| 3.3.5 拟南芥T_2代抗性植株筛选 | 第51-52页 |
| 3.3.6 拟南芥T_2代抗性植株的表型 | 第52-53页 |
| 3.3.7 拟南芥T_2代抗性植株的PCR检测 | 第53-54页 |
| 3.3.8 T2代转基因拟南芥表型观察及表达分析 | 第54-57页 |
| 3.3.8.1 PEG胁迫对转基因拟南芥种子发芽率的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.8.2 PEG胁迫下转基因植株的表型观察 | 第55-56页 |
| 3.3.8.3 转基因拟南芥的表达分析 | 第56-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-69页 |
| 附录 | 第69-72页 |
| 主要仪器 | 第72-73页 |
| 附图 | 第73-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77-78页 |
| 导师简介 | 第78-79页 |
