论文目录 | |
摘要 | 第1-4页 |
abstract | 第4-9页 |
第1章 绪论 | 第9-19页 |
1.1 酒精性肝损伤 | 第9-10页 |
1.1.1 病理特点 | 第9-10页 |
1.1.2 酒精性肝损伤动物模型 | 第10页 |
1.2 酒精性肝损伤过程中分子调控机制研究 | 第10-13页 |
1.2.1 CYP2E1与酒精性肝损伤 | 第10-11页 |
1.2.2 应激分子与酒精性肝损伤 | 第11-12页 |
1.2.3 TGF-βl与酒精性肝损伤 | 第12页 |
1.2.4 肝细胞凋亡与酒精性肝损伤 | 第12-13页 |
1.3 ADAM9介绍 | 第13-14页 |
1.4 CRISPRCas9系统发现与分类 | 第14-19页 |
1.4.1 CRISPR/Cas9系统的作用机理 | 第14-15页 |
1.4.2 CRISPR/Cas9系统清除外源性DNA原理 | 第15页 |
1.4.3 CRISPR/Cas9系统构建 | 第15-16页 |
1.4.4 降低CRISPR/Cas技术基因编辑脱靶效率的研究 | 第16-19页 |
第2章 前言 | 第19-21页 |
第3章 材料与方法 | 第21-37页 |
3.1 实验材料 | 第21-25页 |
3.1.1 细胞和质粒 | 第21页 |
3.1.2 实验动物 | 第21页 |
3.1.3 实验仪器 | 第21页 |
3.1.4 实验试剂及溶液配制 | 第21-25页 |
3.2 实验方法 | 第25-35页 |
3.2.1 实验设计 | 第25-26页 |
3.2.2 CRISPR/Cas9技术靶向突变小鼠Adam9基因三合一质粒构建 | 第26页 |
3.2.3 细菌培养 | 第26-27页 |
3.2.4 质粒提取 | 第27-28页 |
3.2.5 细胞培养 | 第28页 |
3.2.6 细胞转染 | 第28-29页 |
3.2.7 最佳嘌呤酶素浓度 | 第29页 |
3.2.8 嘌呤酶素筛选 | 第29页 |
3.2.9 PCR技术检测 | 第29-30页 |
3.2.10 小鼠尾静脉注射 | 第30-31页 |
3.2.11 动物实验 | 第31页 |
3.2.12 血清AST、ALT酶活性的检测 | 第31-32页 |
3.2.13 蜡块包埋组织切片制作 | 第32页 |
3.2.14 HE染色检测各组小鼠的肝脏损伤情况 | 第32-33页 |
3.2.15 PAS法检测各组小鼠肝脏中糖原的表达情况 | 第33页 |
3.2.16 Hoechst33258染色法检测各组小鼠的肝细胞凋亡情况 | 第33-34页 |
3.2.17 免疫印迹检测蛋白的表达情况 | 第34-35页 |
3.3 实验数据的统计学分析 | 第35-37页 |
第4章 结果 | 第37-41页 |
4.1 CRISPR/Cas9技术靶向突变小鼠Adam9基因三合一质粒 | 第37-38页 |
4.2 C2C12细胞培养和sgRNA活性验证 | 第38页 |
4.3 小鼠血清ALT、AST酶活性的检测结果 | 第38页 |
4.4 肝脏组织HE染色结果 | 第38-39页 |
4.5 肝脏组织PAS染色结果 | 第39页 |
4.6 肝脏组织Hoechst33258染色结果 | 第39页 |
4.7 免疫印迹法检测组织蛋白的表达结果 | 第39-41页 |
第5章 讨论 | 第41-45页 |
5.1 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9与转氨酶和组织损伤的关系 | 第41页 |
5.2 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9和糖原储备的关系 | 第41-42页 |
5.3 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9和细胞凋亡的关系 | 第42页 |
5.4 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9对肝细胞应激分子HSP27、HSP70的影响 | 第42-43页 |
5.5 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9对肝细胞增殖的作用 | 第43页 |
5.6 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9和VEGF的关系 | 第43页 |
5.7 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9和IL-6信号途径的关系 | 第43-44页 |
5.8 问题与展望 | 第44-45页 |
第6章 结论 | 第45-47页 |
参考文献 | 第47-57页 |
缩略语词汇表 | 第57-59页 |
附录Ⅰ 图及说明 | 第59-65页 |
致谢 | 第65-66页 |
攻读学位期间的研究成果 | 第66-67页 |