论文目录 | |
摘要 | 第1-11页 |
ABSTRACT | 第11-13页 |
缩略词表 | 第13-14页 |
第1章 文献综述 | 第14-29页 |
1.1 猪圆环病毒2型流行病学 | 第14-15页 |
1.1.1 猪圆环病毒2型流行病学概述 | 第14-15页 |
1.1.2 猪圆环病毒2型的传播 | 第15页 |
1.2 猪圆环病毒2型分子生物学 | 第15-18页 |
1.2.1 猪圆环病毒的基因组 | 第15-17页 |
1.2.2 猪圆环病毒2型基因组主要编码蛋白及其功能 | 第17-18页 |
1.3 猪圆环病毒2型相关疾病 | 第18-20页 |
1.3.1 多系统衰竭综合征(PMWS) | 第18-19页 |
1.3.2 猪呼吸道疾病综合征(PRDC) | 第19-20页 |
1.3.3 猪皮炎与肾病综合征(PDNS) | 第20页 |
1.4 猪圆环病毒2型的感染机制和免疫反应 | 第20-22页 |
1.4.1 猪圆环病毒2型感染和复制机制 | 第20-21页 |
1.4.2 猪圆环病毒2型致病机制和免疫调节 | 第21-22页 |
1.5 猪圆环病毒2型的常用诊断方法 | 第22-24页 |
1.5.1 聚合酶链式反应(PCR) | 第22-23页 |
1.5.2 酶联免疫吸附法(ELISA) | 第23页 |
1.5.3 电镜技术 | 第23页 |
1.5.4 免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA) | 第23-24页 |
1.6 猪圆环病毒2型疫苗研究概况 | 第24-27页 |
1.6.1 疫苗发展概况 | 第24页 |
1.6.2 现有商业化PCV 2 疫苗 | 第24-25页 |
1.6.3 疫苗研究进展 | 第25-27页 |
1.7 果蝇S2细胞表达系统 | 第27页 |
1.8 研究目的与意义 | 第27-29页 |
第2章 稳定细胞株的筛选 | 第29-42页 |
2.1 材料与方法 | 第30-37页 |
2.1.1 细胞与载体 | 第30页 |
2.1.2 主要试剂 | 第30-31页 |
2.1.3 主要仪器 | 第31页 |
2.1.4 常用试剂的配置 | 第31页 |
2.1.5 PCV 2 Cap基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
2.1.6 表达载体的构建 | 第32-35页 |
2.1.7 重组质粒DNA双酶切及测序鉴定 | 第35页 |
2.1.8 果蝇S2细胞培养 | 第35-36页 |
2.1.9 转染果蝇S2细胞与稳定细胞株筛选 | 第36-37页 |
2.2 结果与分析 | 第37-40页 |
2.2.1 PCV 2 Cap基因PCR扩增 | 第37页 |
2.2.2 重组质粒菌落的PCR鉴定 | 第37-38页 |
2.2.3 重组质粒的双酶切鉴定 | 第38-39页 |
2.2.4 Cap基因序列测定及分析 | 第39页 |
2.2.5 稳定细胞株筛选 | 第39-40页 |
2.3 讨论 | 第40-42页 |
第3章 Cap蛋白诱导表达及抗原性分析 | 第42-51页 |
3.1 材料与方法 | 第42-46页 |
3.1.1 主要试剂与仪器 | 第42-43页 |
3.1.2 常用试剂配制 | 第43页 |
3.1.3 Cap融合蛋白在果蝇S2细胞中的诱导表达与分析 | 第43-44页 |
3.1.4 Western-Blot检测目的蛋白 | 第44-45页 |
3.1.5 间接免疫荧光(IFA)检测S2细胞中Cap蛋白的表达 | 第45页 |
3.1.6 透射电镜(TEM)观察PCV 2 病毒样颗粒(VLPs)组装情况 | 第45-46页 |
3.1.7 超速离心纯化猪圆环病毒2型病毒样颗粒(PCV 2 VLPs) | 第46页 |
3.1.8 间接ELISA检测抗原性与纯化效果 | 第46页 |
3.2 结果与分析 | 第46-49页 |
3.2.1 Western Blot检测目的蛋白Cap | 第46-47页 |
3.2.2 间接免疫荧光(IFA)检测外源基因表达 | 第47-48页 |
3.2.3 透射电镜观测 | 第48-49页 |
3.2.4 间接ELISA检测抗原性与纯化效果 | 第49页 |
3.3 讨论 | 第49-51页 |
第4章 PCV 2 VLPs对小鼠免疫效果评价 | 第51-55页 |
4.1 材料与方法 | 第51-52页 |
4.1.1 实验动物 | 第51页 |
4.1.2 主要试剂 | 第51页 |
4.1.3 疫苗制备与免疫 | 第51-52页 |
4.1.4 猪圆环病毒2型(PCV 2)IgG抗体检测 | 第52页 |
4.2 结果与分析 | 第52-53页 |
4.3 讨论 | 第53-55页 |
第5章 总结与展望 | 第55-57页 |
5.1 全文总结 | 第55页 |
5.2 展望 | 第55-57页 |
参考文献 | 第57-66页 |
硕士在读期间发表论文 | 第66-67页 |
致谢 | 第67页 |