论文目录 | |
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-22页 |
| 1.1 热休克蛋白的研究概况 | 第9-14页 |
| 1.1.1 热休克蛋白家族的分类 | 第9-10页 |
| 1.1.2 热休克蛋白70家族（HSP70s）的分布 | 第10-11页 |
| 1.1.3 热休克蛋白 70（HSP70s）的分子结构 | 第11页 |
| 1.1.4 HSP70s的生物学功能 | 第11-14页 |
| 1.2 HSP70的基因结构和表达调控 | 第14-16页 |
| 1.2.1 HSP70基因的转录调控 | 第14-16页 |
| 1.2.2 HSP70转录后水平的调控 | 第16页 |
| 1.3 染色质结合蛋白概述 | 第16-20页 |
| 1.3.1 H1组蛋白相关概述 | 第17-18页 |
| 1.3.2 HP1BP3的结构与功能 | 第18-20页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第20-22页 |
| 第二章 ChHSP70 转录调控因子的筛选及全长扩增 | 第22-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 实验样品 | 第22-23页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第24页 |
| 2.1.4 主要试剂配方 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 DNA亲和层析筛选ChHSP70转录调控因子 | 第25-26页 |
| 2.2.2 近江牡蛎总RNA提取 | 第26页 |
| 2.2.3 近江牡蛎逆转录扩增cDNA | 第26-27页 |
| 2.2.4 近江牡蛎ChHp1bp3编码区序列扩增 | 第27-35页 |
| 2.3 实验结果 | 第35-39页 |
| 2.3.1 DNA亲和纯化洗脱液电泳检测 | 第35页 |
| 2.3.2 ChHP1BP3质谱检测结果 | 第35-36页 |
| 2.3.3 近江牡蛎总RNA提取 | 第36页 |
| 2.3.4 目的基因编码区PCR扩增 | 第36-37页 |
| 2.3.5 菌落PCR筛选阳性克隆电泳检测 | 第37页 |
| 2.3.6 RACE扩增ChHp1bp3全长cDNA结果 | 第37-38页 |
| 2.3.7 ChHp1bp3的cDNA全序列和蛋白质结构 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论 | 第39-40页 |
| 2.5 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 ChHP1BP3与ChHsp70启动子结合特异性研究 | 第41-63页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-46页 |
| 3.1.1 实验样品 | 第41页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第41-42页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第42-43页 |
| 3.1.4 实验主要试剂配方 | 第43-46页 |
| 3.2 实验方法 | 第46-58页 |
| 3.2.1 近江牡蛎ChHp1bp3重组表达载体构建 | 第46-48页 |
| 3.2.2 近江牡蛎ChHP1BP3蛋白诱导表达 | 第48-51页 |
| 3.2.3 近江牡蛎ChHP1BP3蛋白纯化 | 第51-52页 |
| 3.2.4 目的蛋白ChHP1BP3浓缩 | 第52-53页 |
| 3.2.5 FITC标记ChHsp70调控区序列 | 第53-56页 |
| 3.2.6 非变性凝胶电泳 | 第56-58页 |
| 3.3 实验结果 | 第58-62页 |
| 3.3.1 近江牡蛎ChHp1bp3重组表达体构建 | 第58页 |
| 3.3.2 目的蛋白ChHP1BP3的表达检测 | 第58-59页 |
| 3.3.3 目的蛋白ChHP1BP3的纯化检测 | 第59页 |
| 3.3.4 FITC标记ChHsp70 promoter片段 | 第59-60页 |
| 3.3.5 EMSA蛋白浓度确定 | 第60-61页 |
| 3.3.6 EMSA竞争结合实验 | 第61-62页 |
| 3.4 讨论 | 第62页 |
| 3.5 小结 | 第62-63页 |
| 第四章 ChHP1BP3对ChHsp70转录调控功能的确定 | 第63-89页 |
| 4.1 实验材料 | 第63-65页 |
| 4.1.1 实验样品 | 第63页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第63-65页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第65页 |
| 4.1.4 实验主要试剂配制方法 | 第65页 |
| 4.2 实验方法 | 第65-79页 |
| 4.2.1 RNA干扰鉴定ChHP1BP3对ChHsp70转录调控作用 | 第65-70页 |
| 4.2.2 ChHP1BP3对染色质结构影响 | 第70-71页 |
| 4.2.3 ChHp1bp3的过表达对ChHsp70转录的影响 | 第71-79页 |
| 4.3 实验结果 | 第79-86页 |
| 4.3.1 荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第79-80页 |
| 4.3.2 ChHp1bp3沉默检测其与ChHsp70表达相关性 | 第80-81页 |
| 4.3.3 ChHP1BP3对染色质压缩程度的影响 | 第81-82页 |
| 4.3.4 pGL3-Basic重组真核表达载体构建 | 第82页 |
| 4.3.5 pcDNA3.1 重组真核表达载体构建 | 第82-83页 |
| 4.3.6 含酶切位点序列筛选阳性克隆 | 第83-84页 |
| 4.3.7 重组真核表达载体质粒提取 | 第84-85页 |
| 4.3.8 相对荧光活性检测结果 | 第85-86页 |
| 4.4 讨论 | 第86-88页 |
| 4.5 小结 | 第88-89页 |
| 第五章 ChHsp70与ChHp1bp3对外界胁迫的mRNA响应模式研究 | 第89-98页 |
| 5.1 实验材料 | 第89-90页 |
| 5.1.1 实验样品 | 第89页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第89-90页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第90页 |
| 5.2 实验方法 | 第90-93页 |
| 5.2.1 检测ChHp1bp3和ChHsp70表达的荧光定量PCR方法建立 | 第90-91页 |
| 5.2.2 近江牡蛎ChHp1bp3和ChHsp70对热激响应时间的相关性研究 | 第91页 |
| 5.2.3 CdCl_2处理近江牡蛎ChHp1bp3与ChHsp70表达相关性研究 | 第91-92页 |
| 5.2.4 NP处理近江牡蛎ChHp1bp3与ChHsp70表达相关性研究 | 第92-93页 |
| 5.3 实验结果 | 第93-96页 |
| 5.3.1 近江牡蛎热休克处理后ChHp1bp3和ChHsp70基因的表达相关性 | 第93-94页 |
| 5.3.2 不同浓度CdCl_2持续处理近江牡蛎后ChHp1bp3和ChHsp70基因的表达相关性 | 第94-95页 |
| 5.3.3 不同浓度NP持续处理近江牡蛎后ChHp1bp3和ChHsp70基因的表达相关性 | 第95-96页 |
| 5.4 讨论 | 第96-97页 |
| 5.5 小结 | 第97-98页 |
| 全文总结 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-112页 |
| 附录 | 第112-114页 |
| 研究生期间发表论文清单 | 第114-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
