论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 细菌群体感应概况 | 第12-16页 |
| 1.1.1 革兰氏阴性菌的LuxR/I型信息系统 | 第12-13页 |
| 1.1.2 革兰氏阳性菌中寡肽介导的信息系统 | 第13-14页 |
| 1.1.3 AI-2介导的信息系统 | 第14-15页 |
| 1.1.4 DKPs参与信号传递及群体感应调控 | 第15页 |
| 1.1.5 平行群体感应通道 | 第15-16页 |
| 1.1.6 串连型的群体感应通道 | 第16页 |
| 1.2 水产品特定腐败菌群体感应的研究现状 | 第16-20页 |
| 1.2.1 水产品腐败和特定腐败菌 | 第16-17页 |
| 1.2.2 希瓦氏菌群体感应研究现状 | 第17-18页 |
| 1.2.3 群体感应信号分子的检测方法 | 第18页 |
| 1.2.4 群体感应信号分子的生理调控功能 | 第18-19页 |
| 1.2.5 抑制腐败菌群体感应研究现状 | 第19-20页 |
| 1.3 本文研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第20页 |
| 1.3.2 研究意义 | 第20-21页 |
| 第2章 特定腐败菌Shewanella baltica群体感应信号分子检测方法的建立 | 第21-36页 |
| 2.1 前言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第21页 |
| 2.2.2 主要的试剂和仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.2.1 主要试剂 | 第22页 |
| 2.2.2.2 主要仪器设备 | 第22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-24页 |
| 2.3.1 AHLs标准溶液的配制 | 第22页 |
| 2.3.2 UPLC-QqQ-MS/MS测定AHLs信号分子参数设置 | 第22-23页 |
| 2.3.2.1 超高效液相色谱条件的筛选和优化 | 第22-23页 |
| 2.3.2.2 质谱条件的考察 | 第23页 |
| 2.3.2.3 过滤膜大小的选择 | 第23页 |
| 2.3.3 对AHLs标准品检测线性范围及检测灵敏度的分析 | 第23页 |
| 2.3.4 细菌培养液中AHLs标准品的提取与回收率 | 第23页 |
| 2.3.5 S.baltica菌株生长曲线的绘制 | 第23-24页 |
| 2.3.6 检测AHLs信号分子菌株粗提液的制备 | 第24页 |
| 2.3.7 S.baltica菌液中AHLs的检测 | 第24页 |
| 2.4 结果与分析 | 第24-33页 |
| 2.4.1 超高效液相色谱参数优化 | 第24-25页 |
| 2.4.2 质谱条件的优化 | 第25页 |
| 2.4.3 AHL标准品过滤膜大小的确定 | 第25页 |
| 2.4.4 UPLC-MS/MS检测标准品 | 第25-29页 |
| 2.4.5 检测限和检测线性范围的确定 | 第29-31页 |
| 2.4.6 不同的提取试剂对AHLs标准品的提取及回收率的检测结果分析 | 第31-32页 |
| 2.4.7 S.baltica菌粗提液中AHLs的检测结果 | 第32-33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-34页 |
| 2.6 本章小结 | 第34-36页 |
| 第3章 AHLs信号分子对不同腐败希瓦氏菌致腐能力影响的研究 | 第36-49页 |
| 3.1 前言 | 第36-37页 |
| 3.2 实验材料与试剂 | 第37页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第37页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第37页 |
| 3.2.3 实验设备 | 第37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-39页 |
| 3.3.1 外源AHLs信号分子诱导后菌株生长曲线的绘制 | 第37-38页 |
| 3.3.2 特定腐败菌希瓦氏菌生物被膜的半定量检测 | 第38页 |
| 3.3.2.1 外源AHLs信号分子处理S.baltica 100生物被膜的检测 | 第38页 |
| 3.3.3 外源AHLs信号分子诱导后S.baltica挥发性盐基氮(TVB-N)的检测 | 第38-39页 |
| 3.3.3.1 细菌菌悬液的制备 | 第38页 |
| 3.3.3.2 无菌鱼汁的制备 | 第38-39页 |
| 3.3.3.3 接种与贮藏实验 | 第39页 |
| 3.3.3.4 挥发性盐基氮(TVB-N)的测定 | 第39页 |
| 3.3.4 外源AHLs信号分子诱导后蛋白水解活性检测 | 第39页 |
| 3.3.5 数据处理与统计 | 第39页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第39-47页 |
| 3.4.1 分析外源AHLs信号分子诱导后S.baltica100菌株生长曲线的变化 | 第39-40页 |
| 3.4.2 光学显微镜观察添加信号分子诱导后生物被膜的动态变化分析 | 第40-42页 |
| 3.4.3 运用RCBD数学模型分析信号分子对生物被膜的影响 | 第42-43页 |
| 3.4.4 挥发性盐基氮的检测 | 第43-45页 |
| 3.4.5 蛋白水解活性的检测 | 第45-47页 |
| 3.5 讨论 | 第47页 |
| 3.6 本章小结 | 第47-49页 |
| 第4章 群体感应信号分子产生的基因调控及其诱导腐败相关基因表达的研究 | 第49-64页 |
| 4.1 前言 | 第49页 |
| 4.2 实验材料 | 第49-50页 |
| 4.2.1 菌株及保藏 | 第49-50页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第50页 |
| 4.2.3 实验设备 | 第50页 |
| 4.3 实验方法 | 第50-53页 |
| 4.3.1 AI-2信号分子的检测 | 第50-51页 |
| 4.3.2 AHLs的配制及添加 | 第51页 |
| 4.3.3 总RNA的提取及纯度测定 | 第51-52页 |
| 4.3.3.1 总RNA中DNA的去除 | 第52页 |
| 4.3.4 cDNA的合成 | 第52页 |
| 4.3.5 实时荧光定量PCR | 第52-53页 |
| 4.3.5.1 引物的设计与合成 | 第52-53页 |
| 4.3.6 数据处理与统计 | 第53页 |
| 4.4 结果与分析 | 第53-61页 |
| 4.4.1 荧光定量PCR扩增曲线及引物特异性分析 | 第53-54页 |
| 4.4.2 AI-2信号分子检测结果分析 | 第54-56页 |
| 4.4.3 不同培养时间段AI-2合成相关基因表达情况及其与荧光值的关系 | 第56-57页 |
| 4.4.4 不同培养时间段luxR基因表达情况与AHLs含量的相关关系 | 第57-58页 |
| 4.4.5 外源AHLs对S.baltica菌株luxR类QS基因表达的影响 | 第58-59页 |
| 4.4.6 外源AHLs对S.baltica菌株腐败相关基因表达的影响 | 第59-61页 |
| 4.5 讨论 | 第61-62页 |
| 4.6 本章小结 | 第62-64页 |
| 第5章 结论、创新点及展望 | 第64-66页 |
| 5.1 结论 | 第64页 |
| 5.2 创新点 | 第64-65页 |
| 5.3 展望 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
