论文目录 | |
致谢 | 第1-6页 |
摘要 | 第6-7页 |
Abstract | 第7-9页 |
目次 | 第9-13页 |
第一章 引言 | 第13-27页 |
· 不放氧光合细菌概述 | 第13-17页 |
· 光合细菌的分类 | 第13-14页 |
· 不放氧光合细菌的分布 | 第14-15页 |
· 丝状光合细菌与植物的光合机制的异同 | 第15-17页 |
1.2 嗜热绿色光合细菌Chloroflexus aurantiacus概述 | 第17-24页 |
· 绿小体 | 第18-20页 |
· 色素结合蛋白CsmA | 第20-22页 |
· CsmA蛋白与细菌叶绿素a的结合 | 第22-24页 |
· 论文研究意义和技术路线 | 第24-27页 |
· 实验设计思路 | 第24-25页 |
· 实验主要内容 | 第25-26页 |
· 技术路线 | 第26-27页 |
第二章 色素结合蛋白CsmA的基因克隆和定点突变 | 第27-45页 |
· 实验材料 | 第27-31页 |
· 主要实验仪器 | 第27页 |
· 主要实验试剂 | 第27-28页 |
· 培养基、试剂的配制 | 第28-30页 |
· 载体图谱 | 第30-31页 |
· 实验方法 | 第31-38页 |
· 光合细菌的培养 | 第31页 |
· 细菌基因组的提取(CTAB法) | 第31-32页 |
· PCR扩增目的片段 | 第32-34页 |
· PCR产物的胶回收 | 第34-35页 |
· PCR产物连接T载体 | 第35页 |
· 重组T载体转化E.coli感受态细胞Transl-T1 | 第35-36页 |
· 阳性菌落的PCR鉴定 | 第36页 |
· 重组质粒的提取 | 第36-37页 |
· 重组T质粒、表达载体的双酶切 | 第37页 |
· 目的基因连接表达载体 | 第37-38页 |
· 连接产物转化E.coli感受态细胞BL21(DE3) | 第38页 |
· 实验结果 | 第38-43页 |
· 绿小体色素结合蛋白csmA基因的扩增 | 第38-39页 |
· 重组T载体转化大肠杆菌菌落PCR鉴定 | 第39页 |
· 重组T载体和表达载体的双酶切 | 第39-40页 |
· 酶切产物的连接及阳性菌落的鉴定 | 第40页 |
· csmA基因的“双引物法”定点突变 | 第40-42页 |
· 重组T载体pEASYT1-csmAH25A及其鉴定 | 第42页 |
· 重组T载体和表达载体的双酶切 | 第42-43页 |
· 重组pET28a-csmAH25A表达载体的菌落PCR鉴定 | 第43页 |
· 小结与讨论 | 第43-45页 |
第三章 色素结合蛋白CsmA的复性和纯化 | 第45-62页 |
· 实验材料 | 第45-48页 |
· 主要实验仪器 | 第45页 |
· 主要实验试剂 | 第45-46页 |
· 试剂的配制 | 第46-48页 |
· 实验方法 | 第48-51页 |
· TricineSDS-PAGE的配制、上样及染色 | 第48页 |
· 目的蛋白的诱导 | 第48-49页 |
· 目的蛋白表达位置的确定 | 第49页 |
· 目的蛋白表达条件的优化 | 第49页 |
3.2.5 His SpinTrap的预纯化 | 第49-50页 |
· 包涵体的提取与变性 | 第50页 |
· BCA法蛋白浓度的测定 | 第50-51页 |
· 包涵体的Ni柱纯化和柱上复性 | 第51页 |
· 凝血酶柱切 | 第51页 |
· 实验结果 | 第51-60页 |
· CsmA蛋白表达定位分析 | 第51-52页 |
· CsmA蛋白可溶表达条件优化 | 第52-53页 |
· CsmA蛋白包涵体的预纯化 | 第53-54页 |
· CsmA蛋白包涵体的梯度洗脱 | 第54-55页 |
· 包涵体的柱上复性及纯化 | 第55-56页 |
· 复性后CsmA蛋白浓度BCA测定 | 第56页 |
· CsmAH25A蛋白表达定位分析 | 第56-57页 |
· CsmAH25A蛋白的预纯化 | 第57页 |
· CsmAH25A蛋白的柱上复性及纯化 | 第57-58页 |
· CsmA和CsmAH25A蛋白的凝血酶酶切 | 第58-60页 |
· 小结与讨论 | 第60-62页 |
第四章 细菌叶绿素a的HPLC分析和制备 | 第62-69页 |
· 实验材料 | 第62-63页 |
· 主要实验仪器 | 第62页 |
· 主要实验试剂 | 第62-63页 |
· 试剂的配制 | 第63页 |
· 实验方法 | 第63-64页 |
4.2.1 RfX castenholzii的全色素提取 | 第63页 |
4.2.2 Rfx castenholzii细菌叶绿素a的分析 | 第63-64页 |
4.2.3 Rfx castenholzii细菌叶绿素a的制备 | 第64页 |
· 细菌叶绿素a的冷冻干燥和浓度测定 | 第64页 |
· 蔗糖密度梯度离心提取绿小体 | 第64页 |
· 实验结果 | 第64-68页 |
· RfX.castenholzii细菌叶绿素a的分析 | 第64-65页 |
· RfX.castenholzii细菌叶绿素a的制备 | 第65-66页 |
· RfX.castenholzii细菌叶绿素a的浓缩 | 第66-67页 |
· 蔗糖密度梯度离心提取绿小体 | 第67-68页 |
· 小结与讨论 | 第68-69页 |
第五章 CsmA蛋白和CsmAH25A蛋白与细菌叶绿素a的体外重组 | 第69-74页 |
· 实验材料 | 第69页 |
· 主要实验仪器 | 第69页 |
· 主要实验试剂 | 第69页 |
· 试剂的配置 | 第69页 |
· 实验方法 | 第69-70页 |
· 实验结果 | 第70-72页 |
· CsmA融合蛋白与细菌叶绿素a体外重组前后吸收光谱分析 | 第70-71页 |
· CsmA与细菌叶绿素a体外重组前后吸收光谱分析 | 第71页 |
· CsmAH25A与细菌叶绿素a体外重组前后吸收光谱分析 | 第71-72页 |
· 小结与讨论 | 第72-74页 |
参考文献 | 第74-81页 |
附录 | 第81-83页 |
缩略语 | 第83-84页 |
作者简介 | 第84
页 |