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抗传染性法氏囊病毒单抗的制备和VP2基因的序列分析

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抗传染性法氏囊病毒单抗的制备和VP2基因的序列分析
论文目录
 
摘要第1-5 页
Abstract第5-13 页
文献综述第13-21 页
引言第21-23 页
第一章IBDV 单克隆抗体的制备及其抗原表位初步分析第23-32 页
  1 材料与方法第23-28 页
    · 病毒、细胞株及试验动物第23 页
    · 主要试剂与器材第23 页
    · 主要试验试剂配制第23-24 页
    · IBDV 病毒的增殖与纯化第24 页
    · 抗IBDV 单克隆抗体的制备第24-27 页
      · IBDV 免疫Balb/c 小鼠第24 页
      · 骨髓瘤细胞和脾淋巴细胞准备第24-25 页
      · 间接ELISA 筛选方法的建立和阳性细胞株筛选第25-26 页
      · 阳性细胞株亚克隆和冻存与复苏第26 页
      · 单抗腹水的制备第26-27 页
    · 单抗的鉴定与分析第27-28 页
  2 结果与分析第28-31 页
    · 抗IBDV 单克隆抗体的制备第28 页
      · 间接ELISA 筛选方法的建立第28 页
      · 抗IBDV 单抗的筛选和亚克隆第28 页
    · 抗IBDV 单克隆抗体的鉴定第28-31 页
      · ELISA 效价的测定第28-29 页
      · 单抗亚型的鉴定第29 页
      · 特异性分析第29 页
      · 细胞分泌抗体的稳定性试验第29 页
      · 单抗针对的抗原性分析第29-31 页
  3 讨论第31 页
  4 结论第31-32 页
第二章IBDV-VP2 基因的原核表达及其单克隆抗体的制备第32-54 页
  1 材料与方法第32-42 页
    · 载体、宿主菌与实验动物第32 页
    · 主要试剂和器材第32 页
    · 主要试剂配制第32-34 页
    · IBDV-VP2 基因的克隆第34-37 页
      · IBDV 总RNA 的提取与cDNA 的制备第34-35 页
      · IBDV-VP2 基因的扩增第35 页
      · 重组质粒的构建第35-37 页
    · pET32a-VP2,pGEX-4T-1-VP2 基因的诱导表达第37-40 页
      · IPTG 诱导剂浓度的优化第37 页
      · 诱导时间的优化第37-38 页
      · 可溶性鉴定第38 页
      · 蛋白的大量制备第38 页
      · HIS-VP2 蛋白的纯化第38-39 页
      · HIS-VP2 蛋白的分析第39-40 页
    · 抗IBDV-VP2 蛋白单克隆抗体制备第40-41 页
      · 免疫第40 页
      · 细胞融合第40 页
      · 间接ELISA 筛选方法的建立和阳性株的筛选第40 页
      · 阳性细胞株亚克隆和细胞冻存与复苏第40 页
      · 单抗的大量制备第40-41 页
    · 单克隆抗体的鉴定与分析第41-42 页
      · ELISA 效价的测定第41 页
      · 单抗亚类的鉴定第41 页
      · 特异性分析第41 页
      · 细胞分泌抗体的稳定性试验第41 页
      · 单抗针对的抗原性分析第41-42 页
  2 结果与分析第42-52 页
    · IBDV-VP2 基因的克隆第42-43 页
      · IBDV总RNA的提取第42 页
      · IBDV-VP2 基因的扩增第42 页
      · 重组质粒的构建与鉴定第42-43 页
    · 目的基因的诱导表达第43-46 页
      · IPTG 浓度优化结果第44-45 页
      · 诱导时间的优化第45 页
      · 表达蛋白的可溶性分析第45 页
      · HIS-VP2 蛋白的纯化第45-46 页
    · 纯化蛋白的分析第46-47 页
      · 蛋白浓度的测定第46 页
      · VP2 蛋白的抗原性分析第46-47 页
    · 抗IBDV-VP2 蛋白单克隆抗体制备第47-49 页
      · 间接ELISA 筛选方法的建立第47-49 页
      · 抗IBDV-VP2 单抗的筛选和亚克隆第49 页
    · 单克隆抗体的鉴定与分析第49-52 页
      · ELISA 效价的测定第49 页
      · 单抗亚型的鉴定第49 页
      · 特异性分析第49-50 页
      · 细胞分泌抗体的稳定性试验第50 页
      · 单抗针对的抗原性分析第50-52 页
  3 讨论第52-54 页
第三章IBDV 安徽分离株VP2 基因的克隆及序列分析第54-63 页
  1 材料与方法第54-56 页
    · 载体、宿主菌及病料第54 页
    · 主要试剂和器材及主要试剂的配制第54 页
    · 病料采集和保存第54 页
    · IBDV-VP2 高变区的克隆第54-55 页
      · IBDV 总RNA 的提取与cDNA 的制备第54 页
      · IBDV-VP2 高变区基因的扩增第54-55 页
      · 重组质粒的构建第55 页
    · IBDV-VP2 高变区测序结果的序列分析第55-56 页
  2 结果第56-60 页
    · IBDV 总RNA 提取和RT-PCR第56 页
    · 重组质粒的鉴定第56-57 页
    · VP2 高变区测序结果分析第57-60 页
      · VP2 高变区基因和推导氨基酸的序列分析第57-58 页
      · VP2 高变区基因和推导氨基酸的同源性分析第58-59 页
      · VP2 高变区基因和推导氨基酸的进化树分析第59-60 页
  3 讨论第60-62 页
  4 结论第62-63 页
参考文献第63-69 页
致谢第69-70 页
附录第70-71 页
作者简介第71页

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