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花生转录因子AhWRI1基因的克隆与功能研究
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花生转录因子AhWRI1基因的克隆与功能研究
论文目录
 
摘要第1-5页
abstract第5-11页
第一章 引言第11-19页
　　1.1 植物油供求现状及意义第11-12页
　　1.2 植物油脂合成途径第12-13页
　　1.3 植物油合成相关转录因子研究进展第13-15页
　　　　1.3.1 油脂积累相关B3家族转录因子第13-14页
　　　　1.3.2 油脂积累相关HAP3家族转录因子第14页
　　　　1.3.3 其他油脂积累相关的转录调控因子第14-15页
　　1.4 AP2/EREBP转录因子超家族第15-16页
　　1.5 转录因子WRI1的研究进展第16-17页
　　　　1.5.1 转录因子WRI1的发现及结构第16页
　　　　1.5.2 转录因子WRI1的功能分析第16-17页
　　1.6 酵母单杂交技术第17页
　　1.7 研究目的和意义第17-19页
第二章 AhWRI1-1和AhWRI1-2基因的表达特异性研究第19-37页
　　2.1 实验材料第19-20页
　　　　2.1.1 植物材料第19页
　　　　2.1.2 主要试剂及仪器第19-20页
　　2.2 实验方法第20-26页
　　　　2.2.1 非生物逆境胁迫和激素处理方法第20页
　　　　2.2.2 基因的克隆第20-26页
　　　　　　2.2.2.1 总RNA提取第20-21页
　　　　　　2.2.2.2 反转录合成第一链cDNA第21页
　　　　　　2.2.2.3 目的基因的获得第21-22页
　　　　　　2.2.2.4 PCR反应产物的回收第22-23页
　　　　　　2.2.2.5 目的基因与克隆载体的连接第23页
　　　　　　2.2.2.6 大肠杆菌的转化第23页
　　　　　　2.2.2.7 质粒的提取第23页
　　　　　　2.2.2.8 质粒的双酶切验证第23-24页
　　　　　　2.2.2.9 生物信息学分析第24页
　　　　　　2.2.2.10 系统发育树分析第24页
　　　　　　2.2.2.11 实时荧光定量PCR第24-25页
　　　　　　2.2.2.12 转录因子酵母转录激活活性分析第25-26页
　　2.3 结果与分析第26-35页
　　　　2.3.1 基因的克隆第26-27页
　　　　2.3.2 基因的生物信息学分析第27-32页
　　　　　　2.3.2.1 基因序列分析第27-29页
　　　　　　2.3.2.2 编码蛋白的理化性质及结构分析第29-30页
　　　　　　2.3.2.3 系统发育分析第30-32页
　　　　2.3.3 基因表达特性分析第32-34页
　　　　　　2.3.3.1 基因在不同组织及种子不同发育时期的表达特性第32页
　　　　　　2.3.3.2 基因在非生物胁迫下的表达特性第32-33页
　　　　　　2.3.3.3 基因在植物激素处理下的表达特性第33-34页
　　　　2.3.4 转录激活活性分析第34-35页
　　2.4 讨论第35-37页
第三章 亚细胞定位及重组蛋白的表达第37-47页
　　3.1 实验材料第37-38页
　　　　3.1.1 主要酶、菌种及质粒第37页
　　　　3.1.2 主要试剂与仪器第37-38页
　　3.2 实验方法第38-43页
　　　　3.2.1 亚细胞定位分析第38-40页
　　　　　　3.2.1.1 重组质粒载体的构建第38-39页
　　　　　　3.2.1.2 拟南芥原生质体的提取第39页
　　　　　　3.2.1.3 PEG介导重组载体的转化第39-40页
　　　　　　3.2.1.4 激光扫描共聚焦显微镜下荧光信号的观察第40页
　　　　3.2.2 目的蛋白的原核表达第40-41页
　　　　　　3.2.2.1 原核表达载体构建第40页
　　　　　　3.2.2.2 选择表达菌株和最佳诱导温度第40-41页
　　　　　　3.2.2.3 选择最佳诱导时间第41页
　　　　3.2.3 SDS-PAGE电泳检测方法第41-43页
　　3.3 结果与分析第43-46页
　　　　3.3.1 拟南芥原生质体中两基因的亚细胞定位第43-44页
　　　　3.3.2 目的蛋白的原核表达第44-46页
　　　　　　3.3.2.1 融合蛋白表达菌株和最佳诱导温度的选择第44-45页
　　　　　　3.3.2.2 融合蛋白最佳诱导时间的选择第45-46页
　　3.4 讨论第46-47页
第四章 拟南芥及烟草的遗传转化第47-58页
　　4.1 实验材料第47-48页
　　　　4.1.1 植物材料第47页
　　　　4.1.2 主要试剂及仪器第47-48页
　　4.2 实验方法第48-53页
　　　　4.2.1 植物叶片基因组DNA快速提取方法第48页
　　　　4.2.2 植物表达载体构建第48页
　　　　4.2.3 农杆菌感受态的制备第48-49页
　　　　4.2.4 拟南芥的遗传转化第49-50页
　　　　　　4.2.4.1 冻融法转化EHA105农杆菌以及阳性克隆的筛选第49页
　　　　　　4.2.4.2 拟南芥待转化植株的培养第49-50页
　　　　　　4.2.4.3 农杆菌侵染拟南芥第50页
　　　　　　4.2.4.4 拟南芥转化子的筛选和鉴定第50页
　　　　4.2.5 烟草的遗传转化第50-53页
　　　　　　4.2.5.1 电击法转化农杆菌第50-51页
　　　　　　4.2.5.2 烟草无菌苗的培养第51页
　　　　　　4.2.5.3 农杆菌介导的烟草遗传转化第51-53页
　　　　4.2.6 转基因植株种子油脂含量分析第53页
　　4.3 结果与分析第53-56页
　　　　4.3.1 转基因拟南芥的分子生物学检测第53-54页
　　　　4.3.2 转基因拟南芥的遗传稳定性分析第54页
　　　　4.3.3 转基因烟草的分子生物学检测第54-56页
　　　　4.3.4 转基因植株种子含油量分析第56页
　　4.4 讨论第56-58页
结论第58-60页
参考文献第60-66页
致谢第66-67页
攻读硕士期间发表学术论文目录第67-68页

本篇论文共68页，点击这进入下载页面。
 
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