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拟南芥中miRNA通路新因子筛选系统的验证与应用

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拟南芥中miRNA通路新因子筛选系统的验证与应用
论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-10页
第一章.文献综述第10-19页
  1.1 miRNA的研究现状第10-15页
    1.1.1 植物中的miRNA第10页
    1.1.2 植物中miRNA的合成第10-11页
    1.1.3 植物中miRNA的降解第11-12页
    1.1.4 植物中miRNA的运动第12-13页
    1.1.5 植物中miRNA调节基因表达的机制第13-14页
    1.1.6 植物中miRNA通过对靶基因的调控发挥功能第14-15页
  1.2 正向遗传筛选体系第15页
  1.3 背景植株介绍第15-16页
  1.4 AGO1蛋白的研究进展第16-17页
  1.5 BON1蛋白的研究进展第17-18页
  1.6 研究目的与意义第18-19页
第二章.材料与方法第19-33页
  2.1 实验材料第19-21页
    2.1.1 植物材料第19页
    2.1.2 实验试剂第19-20页
      2.1.2.1 植物培养所需试剂第19页
      2.1.2.2 基因组DNA提取试剂第19页
      2.1.2.3 基因型鉴定第19-20页
      2.1.2.4 RNA的提取、反转录与荧光定量PCR第20页
      2.1.2.5 Northern Blot的实验试剂第20页
      2.1.2.6 Western Blot的实验试剂第20页
    2.1.3 实验仪器设备第20-21页
    2.1.4 数据库和生物软件第21页
  2.2 实验方法第21-33页
    2.2.1 植物的培养第21-22页
      2.2.1.1 培养土中拟南芥的培养第21页
2.2.1.21/2MS培养基中拟南芥的培养第21-22页
    2.2.2 EMS诱变与筛选第22页
    2.2.3 克隆群体的建立第22页
    2.2.4 基因组DNA的提取第22-23页
    2.2.5 全基因组重测序第23页
    2.2.6 测序数据的分析和突变位点的确定与验证第23-24页
    2.2.7 荧光定量PCR检测miRNA的积累第24-27页
      2.2.7.1 植物总RNA的提取第24-25页
      2.2.7.2 茎环RT-PCR反转录合成miRNA的cDNA第25-26页
      2.2.7.3 荧光定量PCR反应第26-27页
    2.2.8 Northern Blot检测mi RNA的积累第27-29页
    2.2.9 荧光定量PCR检测miRNA靶标和pri-miRNA的表达量第29-31页
      2.2.9.1 植物总RNA的提取第29页
      2.2.9.2 mRNA和pri-miRNA的反转录与荧光定量PCR反应第29-31页
    2.2.10 突变体表型回复第31-33页
      2.2.10.1 载体的构建第31页
      2.2.10.2 根癌农杆菌的转化第31页
      2.2.10.3 突变体的花序浸染第31-32页
      2.2.10.4 植物总蛋白质的提取第32页
      2.2.10.5 蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳配置第32-33页
      2.2.10.6 Western Blot第33页
第三章.实验结果与讨论第33-43页
  3.1 SUP-E45突变体第33-36页
    3.1.1 SUP-E45的获得及表型描述第33-34页
    3.1.2 SUP-E45突变中内源miRNA及其靶mRNA的表达量第34-35页
    3.1.3 突变位点的检测与鉴定第35-36页
  3.2 突变体ab58的研究第36-41页
    3.2.1 突变体ab58的获得与表型分析第36页
    3.2.2 突变体ab58的基因型鉴定第36-38页
    3.2.3 ab58突变体中内源miRNA,pri-miRNA及其靶mRNA的表达量第38-40页
    3.2.4 突变体的表型回复突变分析第40-41页
  3.3 讨论第41-43页
结论第43-44页
参考文献第44-50页
致谢第50页

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