论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 一 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 高温胁迫对植物的影响 | 第11-13页 |
| 1.1.1 高温胁迫对膜系统的破环作用 | 第11-12页 |
| 1.1.2 高温胁迫对蛋白和酶的影响 | 第12页 |
| 1.1.3 高温胁迫造成叶片活性氧累积 | 第12-13页 |
| 1.1.4 高温胁迫诱导细胞自噬发生 | 第13页 |
| 1.2 LEA蛋白的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 LEA蛋白概念 | 第13-14页 |
| 1.2.2 LEA蛋白的理化性质与分类 | 第14-15页 |
| 1.3 LEA蛋白的多重保护作用 | 第15-17页 |
| 1.3.1 LEA蛋白对蛋白质的保护作用 | 第15页 |
| 1.3.2 LEA蛋白对膜结构稳定作用 | 第15-16页 |
| 1.3.3 LEA蛋白与非还原性糖互作 | 第16页 |
| 1.3.4 LEA蛋白结合离子 | 第16-17页 |
| 1.4 大豆PM1蛋白的发现及其功能 | 第17页 |
| 1.5 酵母在LEA蛋白研究中的应用 | 第17页 |
| 1.6 酿酒酵母Δ TPS2的特性与海藻糖理化性质 | 第17-19页 |
| 1.7 本研究的目的与意义 | 第19-20页 |
| 二 材料与方法 | 第20-33页 |
| 2.1 材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 菌株、载体和抗体 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要设备与仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 主要培养基与试剂的配置 | 第23-26页 |
| 2.2.1 主要培养基的配置 | 第23-24页 |
| 2.2.2 电泳及免疫印迹相关试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.3 酵母转染相关试剂 | 第25页 |
| 2.2.4 蛋白亲和层析纯化相关试剂 | 第25-26页 |
| 2.3 方法 | 第26-33页 |
| 2.3.1 筛选具敏感性状酵母突变株 | 第26页 |
| 2.3.2 PM1蛋白的表达纯化 | 第26-27页 |
| 2.3.3 酵母感受态制备与重组载体转染 | 第27-28页 |
| 2.3.4 酵母重组子的验证 | 第28-29页 |
| 2.3.5 SDS-PAGE电泳 | 第29页 |
| 2.3.6 BCA法测蛋白浓度 | 第29-30页 |
| 2.3.7 Δ TPS2重组子对热胁迫的耐受性实验 | 第30页 |
| 2.3.8 酵母体内海藻糖含量检测 | 第30-31页 |
| 2.3.9 酵母可溶性总蛋白的提取 | 第31页 |
| 2.3.10 热胁迫下，大豆PM1蛋白对酵母可溶性蛋白热聚集度的保护 | 第31-32页 |
| 2.3.11 线粒体膜电位检测 | 第32-33页 |
| 三 结果 | 第33-44页 |
| 3.1 敏感性状酵母突变株的筛选和鉴定 | 第33-36页 |
| 3.1.1 对高温敏感的酵母突变株筛选及鉴定 | 第33页 |
| 3.1.2 对H2O2胁迫敏感的酵母突变株筛选及鉴定 | 第33-34页 |
| 3.1.3 对NaCl胁迫敏感的酵母突变株筛选及鉴定 | 第34页 |
| 3.1.4 对Cu2+和Cd2+离子胁迫敏感的酵母突变株筛选及鉴定 | 第34-35页 |
| 3.1.5 敏感性状酵母突变株的筛选和鉴定小结 | 第35-36页 |
| 3.2 酵母突变株的转染与鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.1 酵母突变株的菌液PCR鉴定 | 第36页 |
| 3.2.2 PM1蛋白在Δ TPS2中的表达验证 | 第36-37页 |
| 3.3 PM1表达可提高突变体酵母（Δ TPS2）的耐热性 | 第37-39页 |
| 3.3.1 平板法检测PM1蛋白的表达可提 Δ TPS2的耐热性 | 第37-38页 |
| 3.3.2 生长曲线检测PM1蛋白可提高高温敏感酵母（Δ TPS2）的耐热性 | 第38-39页 |
| 3.4 热胁迫前后酵母突变体内海藻糖含量测定 | 第39-40页 |
| 3.5 PM1蛋白可抑制酵母可溶性总蛋白热聚集 | 第40-41页 |
| 3.6 PM1对热胁迫酵母体内线粒体膜（电位）的保护 | 第41-44页 |
| 四 讨论 | 第44-46页 |
| 4.1 PM1蛋白可一定程度下保护热胁迫的酵母细胞中可溶性蛋白 | 第44页 |
| 4.2 PM1蛋白可保护热胁迫下的线粒体膜 | 第44-46页 |
| 五 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 附录 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 攻读硕士期间的研究成果 | 第57页 |
