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重组人绒毛膜促性腺激素(HCG)在大肠杆菌中的表达研究

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重组人绒毛膜促性腺激素(HCG)在大肠杆菌中的表达研究
论文目录
 
摘要第1-6页
Abstract第6-11页
第1章 绪论第11-18页
  1.1 人绒毛膜促性腺激素的简介第11-12页
  1.2 人绒毛膜促性腺激素的研究背景第12页
  1.3 人绒毛膜促性腺激素的进展第12-14页
  1.4 人绒毛膜促性腺激素的作用第14-16页
    1.4.1 人绒毛膜促性腺激素对疾病的诊断作用第14-15页
    1.4.2 人绒毛膜促性腺激素肿瘤中的作用第15-16页
  1.5 大肠杆菌表达系统概述第16页
  1.6 pGEX-4T-1 载体第16-17页
  1.7 本课题研究内容及意义第17-18页
第2章 人绒毛膜促性腺激素表达载体的构建第18-43页
  2.1 实验材料第18-20页
    2.1.1 菌株和质粒第18页
    2.1.2 培养基和溶液第18-19页
    2.1.3 试剂盒、仪器设备第19-20页
  2.2 试验方法第20-32页
    2.2.1 菌种的培养和保藏第20页
    2.2.2 DH5α 大肠杆菌感受态细胞的制备第20-21页
    2.2.3 人绒毛膜促性腺激素的提取第21-24页
    2.2.4 PGEX-4T-1 载体质粒的提取第24-27页
    2.2.5 表达型PGEX-4T-1 载体质粒的酶切及纯化第27-28页
    2.2.6 目的片段HCG双酶切及纯化第28-29页
    2.2.7 PGEX-4T-1 与PCR-HCG的连接反应第29页
    2.2.8 重组子转化第29-31页
    2.2.9 重组质粒的鉴定第31-32页
  2.3 实验结果第32-42页
    2.3.1 质粒提取后实验结果第32-34页
    2.3.2 HCG PCR扩增结果第34-35页
    2.3.3 PGEX-4T-1 酶切以及纯化后电泳结果第35-36页
    2.3.4 重组表达质粒鉴定第36-42页
  2.4 本章小结第42-43页
第3章 重组质粒在大肠杆菌中的表达第43-55页
  3.1 实验材料及设备第43-44页
    3.1.1 菌株和质粒第43页
    3.1.2 培养基和溶液第43-44页
    3.1.3 试剂盒、仪器设备第44页
  3.2 实验方法第44-51页
    3.2.0 活化大肠杆菌BL2l(DE3)第44-45页
    3.2.1 制备大肠杆菌BL2l(DE3)的感受态细胞第45页
    3.2.2 转化大肠杆菌BL21(DE3),获得各自的表达菌株第45页
    3.2.3 种子液的制备第45页
    3.2.4 IPTG诱导表达第45-46页
    3.2.5 菌体破碎第46页
    3.2.6 SephadexG-100 层析第46-47页
    3.2.7 GST融合蛋白的表达与纯化第47-48页
    3.2.8 SDS-PAGE电泳第48-49页
    3.2.9 Westernblot印迹分析第49-50页
    3.2.10 活性分析第50-51页
  3.3 结果分析第51-54页
    3.3.1 重组质粒的转化第51-52页
    3.3.2 重组蛋白的聚丙烯酰胺及westernblot结果第52-53页
    3.3.3 重组蛋白的活性分析第53-54页
  3.4 本章小结第54-55页
第4章 重组质粒表达条件的优化设计第55-66页
  4.1 主要仪器与材料第56-57页
    4.1.1 主要试剂及其配置第56页
    4.1.2 仪器设备与试剂盒第56-57页
  4.2 实验方法第57-61页
    4.2.1 改变培养基配方第57页
    4.2.2 改变培养温度第57-58页
    4.2.3 改变培养时间第58页
    4.2.4 改变诱导剂IPTG浓度第58-59页
    4.2.5 不同初始浓度菌种对目标蛋白表达的影响第59-60页
    4.2.6 菌液中沉淀包涵体的变性、复性第60页
    4.2.7 蛋白的表达与纯化第60页
    4.2.8 蛋白质的检测第60-61页
  4.3 结果与分析第61-65页
    4.3.1 标准曲线第61-62页
    4.3.2 培养基对大肠杆菌表达的影响第62页
    4.3.3 培养温度对大肠杆菌表达的影响第62-63页
    4.3.4 培养时间对大肠杆菌表达的影响第63页
    4.3.5 IPTG诱导剂浓度对大肠杆菌表达的影响第63-64页
    4.3.6 诱导前菌体密度对大肠杆菌表达的影响第64页
    4.3.7 经纯化、变性复性等处理后产物SDS--PAGE结果第64-65页
  4.4 本章小结第65-66页
第5章 分析与讨论第66-72页
  5.1 表达系统的分析第66-68页
  5.2 表达产量的分析第68-69页
  5.3 表达后蛋白的活性分析第69页
  5.4 实验重点与难点第69-71页
    5.4.1 实验过程中遇到的问题第70-71页
  5.5 本章小结第71-72页
结论第72-73页
参考文献第73-77页
攻读硕士学位期间承担的科研任务与主要成果第77-78页
致谢第78页

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