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椰果中产β-甘露聚糖酶内生细菌的筛选及酶学特性研究
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椰果中产β-甘露聚糖酶内生细菌的筛选及酶学特性研究
论文目录
摘要
第1-7页
ABSTRACT
第7-13页
第一章 前言
第13-23页
1.1 甘露聚糖
第13-14页
1.1.1 甘露聚糖的分类
第13-14页
1.1.2 甘露聚糖的应用
第14页
1.2 β-甘露聚糖酶
第14-19页
1.2.1 β-甘露聚糖酶的来源
第14-15页
1.2.2 β-甘露聚糖酶基因的性质
第15-16页
1.2.3 β-甘露聚糖酶的应用
第16-19页
1.3 植物内生细菌
第19-21页
1.3.1 植物内生细菌的来源
第19页
1.3.2 植物内生细菌的多样性
第19-20页
1.3.3 植物内生细菌的应用
第20-21页
1.4 本课题的研究目的和意义
第21-23页
第二章 内生细菌的分离、筛选及鉴定
第23-43页
2.1 材料与方法
第23-29页
2.1.1 材料
第23-27页
2.1.2 植物表面消毒方法
第27页
2.1.3 产 β-甘露聚糖酶菌株的初筛
第27页
2.1.4 产 β-甘露聚糖酶菌株的复筛
第27-28页
2.1.5 β-甘露聚糖酶分布
第28页
2.1.6 实验菌株生长曲线
第28页
2.1.7 实验菌株DNA的提取
第28页
2.1.8 菌株 16S rDNA扩增
第28-29页
2.1.9 系统发育树的构建
第29页
2.2 结果与分析
第29-39页
2.2.1 甘露糖标准曲线
第29页
2.2.2 椰肉表面消毒
第29-31页
2.2.3 椰果内生细菌分离结果
第31-32页
2.2.4 内生细菌 16S rDNA扩增结果
第32-35页
2.2.5 产 β-甘露聚糖酶菌株的初筛
第35-36页
2.2.6 产 β-甘露聚糖酶菌株的复筛
第36-37页
2.2.7 β-甘露聚糖酶的分布
第37页
2.2.8 实验菌株的生长曲线
第37页
2.2.9 实验菌株的鉴定
第37-39页
2.2.10 菌株YZ-21 系统发育树的构建
第39页
2.3 讨论
第39-43页
第三章 实验菌株发酵条件的优化
第43-53页
3.1 材料与方法
第43-46页
3.1.1 材料
第43页
3.1.2 培养基
第43页
3.1.3 培养条件对菌株产酶的影响
第43-44页
3.1.4 菌株产酶培养基的优化
第44-46页
3.2 结果与分析
第46-52页
3.2.1 培养条件对菌株产酶的影响
第46-48页
3.2.2 培养基对菌株产酶的影响
第48-52页
3.3 讨论
第52-53页
第四章 酶的纯化及酶学特性研究
第53-65页
4.1 材料与方法
第53页
4.1.1 材料
第53页
4.2 β-甘露聚糖酶的纯化
第53-54页
4.2.1 乙醇沉淀
第53页
4.2.2 硫酸铵盐析
第53页
4.2.3 双水相萃取
第53-54页
4.3 β-甘露聚糖酶酶学特性研究
第54-55页
4.3.1 温度对酶活的影响
第54页
4.3.2 温度对酶稳定性的影响
第54页
4.3.3 pH对酶活的影响
第54页
4.3.4 pH对酶稳定性的影响
第54-55页
4.3.5 金属离子和EDTA对酶活的影响
第55页
4.3.6 底物特异性
第55页
4.3.7 酶动力常数的测定
第55页
4.4 结果与分析
第55-63页
4.4.1 乙醇沉淀法
第55-56页
4.4.2 硫酸铵盐析法
第56页
4.4.3 双水相萃取法
第56-58页
4.4.4 三种分离方法对酶分离的影响
第58页
4.4.5 温度对酶稳定性的影响
第58-60页
4.4.6 pH对酶活的影响
第60页
4.4.7 pH对酶稳定性的影响
第60页
4.4.8 金属离子和EDTA对 β-甘露聚糖酶活的影响
第60-61页
4.4.9 β-甘露聚糖酶底物特异性
第61-62页
4.4.10 β-甘露聚糖酶酶动力常数
第62-63页
4.5 讨论
第63-65页
第五章 产酶基因的克隆、表达及重组酶研究
第65-79页
5.1 材料与方法
第65-71页
5.1.1 材料
第65页
5.1.2 基因组DNA的提取
第65页
5.1.3 β-甘露聚糖酶基因片段的克隆
第65-67页
5.1.4 目的基因与表达载体pET-32a(+)连接及基因工程菌的构建
第67-69页
5.1.5 manA基因在E.coli BL 21 中的诱导表达
第69页
5.1.6 重组 β-甘露聚糖酶的SDS-PAGE电泳分析
第69页
5.1.7 重组 β-甘露聚糖酶酶学性质的测定
第69-71页
5.2 结果与分析
第71-78页
5.2.1 YZ-21 基因片段的克隆和序列分析
第71-72页
5.2.2 基因片段manA蛋白三维结构分析
第72-75页
5.2.3 原核表达载体的构建
第75页
5.2.4 重组蛋白诱导表达
第75-76页
5.2.5 重组 β-甘露聚糖酶酶学性质
第76-78页
5.3 讨论
第78-79页
结论
第79-81页
参考文献
第81-89页
致谢
第89-91页
攻读学位期间发表的学术论文目录
第91-92页
本篇论文共
92
页,
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