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椰果中产β-甘露聚糖酶内生细菌的筛选及酶学特性研究

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椰果中产β-甘露聚糖酶内生细菌的筛选及酶学特性研究
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-13页
第一章 前言第13-23页
  1.1 甘露聚糖第13-14页
    1.1.1 甘露聚糖的分类第13-14页
    1.1.2 甘露聚糖的应用第14页
  1.2 β-甘露聚糖酶第14-19页
    1.2.1 β-甘露聚糖酶的来源第14-15页
    1.2.2 β-甘露聚糖酶基因的性质第15-16页
    1.2.3 β-甘露聚糖酶的应用第16-19页
  1.3 植物内生细菌第19-21页
    1.3.1 植物内生细菌的来源第19页
    1.3.2 植物内生细菌的多样性第19-20页
    1.3.3 植物内生细菌的应用第20-21页
  1.4 本课题的研究目的和意义第21-23页
第二章 内生细菌的分离、筛选及鉴定第23-43页
  2.1 材料与方法第23-29页
    2.1.1 材料第23-27页
    2.1.2 植物表面消毒方法第27页
    2.1.3 产 β-甘露聚糖酶菌株的初筛第27页
    2.1.4 产 β-甘露聚糖酶菌株的复筛第27-28页
    2.1.5 β-甘露聚糖酶分布第28页
    2.1.6 实验菌株生长曲线第28页
    2.1.7 实验菌株DNA的提取第28页
    2.1.8 菌株 16S rDNA扩增第28-29页
    2.1.9 系统发育树的构建第29页
  2.2 结果与分析第29-39页
    2.2.1 甘露糖标准曲线第29页
    2.2.2 椰肉表面消毒第29-31页
    2.2.3 椰果内生细菌分离结果第31-32页
    2.2.4 内生细菌 16S rDNA扩增结果第32-35页
    2.2.5 产 β-甘露聚糖酶菌株的初筛第35-36页
    2.2.6 产 β-甘露聚糖酶菌株的复筛第36-37页
    2.2.7 β-甘露聚糖酶的分布第37页
    2.2.8 实验菌株的生长曲线第37页
    2.2.9 实验菌株的鉴定第37-39页
    2.2.10 菌株YZ-21 系统发育树的构建第39页
  2.3 讨论第39-43页
第三章 实验菌株发酵条件的优化第43-53页
  3.1 材料与方法第43-46页
    3.1.1 材料第43页
    3.1.2 培养基第43页
    3.1.3 培养条件对菌株产酶的影响第43-44页
    3.1.4 菌株产酶培养基的优化第44-46页
  3.2 结果与分析第46-52页
    3.2.1 培养条件对菌株产酶的影响第46-48页
    3.2.2 培养基对菌株产酶的影响第48-52页
  3.3 讨论第52-53页
第四章 酶的纯化及酶学特性研究第53-65页
  4.1 材料与方法第53页
    4.1.1 材料第53页
  4.2 β-甘露聚糖酶的纯化第53-54页
    4.2.1 乙醇沉淀第53页
    4.2.2 硫酸铵盐析第53页
    4.2.3 双水相萃取第53-54页
  4.3 β-甘露聚糖酶酶学特性研究第54-55页
    4.3.1 温度对酶活的影响第54页
    4.3.2 温度对酶稳定性的影响第54页
    4.3.3 pH对酶活的影响第54页
    4.3.4 pH对酶稳定性的影响第54-55页
    4.3.5 金属离子和EDTA对酶活的影响第55页
    4.3.6 底物特异性第55页
    4.3.7 酶动力常数的测定第55页
  4.4 结果与分析第55-63页
    4.4.1 乙醇沉淀法第55-56页
    4.4.2 硫酸铵盐析法第56页
    4.4.3 双水相萃取法第56-58页
    4.4.4 三种分离方法对酶分离的影响第58页
    4.4.5 温度对酶稳定性的影响第58-60页
    4.4.6 pH对酶活的影响第60页
    4.4.7 pH对酶稳定性的影响第60页
    4.4.8 金属离子和EDTA对 β-甘露聚糖酶活的影响第60-61页
    4.4.9 β-甘露聚糖酶底物特异性第61-62页
    4.4.10 β-甘露聚糖酶酶动力常数第62-63页
  4.5 讨论第63-65页
第五章 产酶基因的克隆、表达及重组酶研究第65-79页
  5.1 材料与方法第65-71页
    5.1.1 材料第65页
    5.1.2 基因组DNA的提取第65页
    5.1.3 β-甘露聚糖酶基因片段的克隆第65-67页
    5.1.4 目的基因与表达载体pET-32a(+)连接及基因工程菌的构建第67-69页
    5.1.5 manA基因在E.coli BL 21 中的诱导表达第69页
    5.1.6 重组 β-甘露聚糖酶的SDS-PAGE电泳分析第69页
    5.1.7 重组 β-甘露聚糖酶酶学性质的测定第69-71页
  5.2 结果与分析第71-78页
    5.2.1 YZ-21 基因片段的克隆和序列分析第71-72页
    5.2.2 基因片段manA蛋白三维结构分析第72-75页
    5.2.3 原核表达载体的构建第75页
    5.2.4 重组蛋白诱导表达第75-76页
    5.2.5 重组 β-甘露聚糖酶酶学性质第76-78页
  5.3 讨论第78-79页
结论第79-81页
参考文献第81-89页
致谢第89-91页
攻读学位期间发表的学术论文目录第91-92页

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