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西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白基因的转化及其抗病分析

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西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白基因的转化及其抗病分析
论文目录
 
摘要第1-4页
Abstract第4-6页
英文缩写词第6-11页
第一部分 文献综述 引言第11-29页
1.抗病毒基因工程的研究进展第11-23页
  1.1 病原来源的抗性基因策略第11-18页
    1.1.1 病毒蛋白介导的抗性策略第11-15页
      1.1.1.1 外壳蛋白介导的抗性第11-13页
      1.1.1.2 复制酶基因介导的抗性第13-14页
      1.1.1.3 运动蛋白介导的抗性第14-15页
      1.1.1.4 其他蛋白介导的抗性策略第15页
    1.1.2 病毒RNA介导的抗性策略第15-18页
      1.1.2.1 卫星RNA基因策略第15-16页
      1.1.2.2 病毒反义RNA第16-17页
      1.2.2.3 缺陷干扰RNA第17页
      1.2.2.4 人工微小RNA介导的抗性策略第17-18页
  1.2 植物来源的病毒抗性基因策略第18-21页
    1.2.1 显性抗病基因介导的策略第18页
    1.2.2 植物隐性R基因介导的抗性第18-20页
    1.2.3 防御应答因子第20-21页
  1.3 其他来源的基因介导的抗性第21-22页
    1.3.1 抑制剂蛋白介导的抗性第21页
    1.3.2 核酸基因抗性策略第21-22页
    1.3.3 植物抗体介导的抗性第22页
    1.3.4 其他抗性策略第22页
  1.4 抗病毒基因工程中存留的问题第22-23页
2.甜瓜及其基因工程研究进展第23-28页
  2.1 甜瓜组培研究进展第23-26页
    2.1.1 种子处理方法第23-24页
    2.1.2 消毒方法对种子萌发的影响第24页
    2.1.3 基因型对诱导不定芽的影响第24页
    2.1.4 苗龄对诱导不定芽的影响第24页
    2.1.5 外植体对诱导不定芽的影响第24-25页
    2.1.6 激素组合对分化的影响第25-26页
    2.1.7 培养条件对分化的影响第26页
  2.2 转基因技术在甜瓜上的应用第26-28页
    2.2.1 遗传转化的方法第26页
    2.2.2 预培养对转化的影响第26-27页
    2.2.3 共培养对转化的影响第27-28页
  2.3 转基因甜瓜抗病性的改良和展望第28页
3.研究目的与意义第28-29页
第二部分 实验内容第29-60页
第一章 WMV CP基因的克隆及植物表达载体的构建第29-40页
1 材料、药剂与仪器第29-30页
  1.1 材料第29页
  1.2 实验试剂及培养基第29-30页
  1.3 仪器和设备第30页
2 方法第30-35页
  2.1 植物RNA提取第30-31页
  2.2 WMV cDNA的合成第31页
  2.3 PCR扩增第31-32页
  2.4 T-A克隆及转化第32页
  2.5 菌落PCR及双酶切鉴定重组质粒pEASY-T1-CP第32-33页
  2.6 双酶切质粒pEASY-T1-CP和载体pCAMBIA2300并回收第33页
  2.7 连接有效片段第33-34页
  2.8 转化并筛选重组质粒pCAMBIA2300-CP第34-35页
3 结果第35-39页
  3.1 西瓜花叶病毒CP基因第35页
  3.2 菌落PCR鉴定pEASY-T1-CP第35-36页
  3.3 双酶切重组质粒pEASY-T1-CP及pCAMBIA230第36页
  3.4 回收载体pEASY-T1-CP和pCAMBIA2300有效片段第36-37页
  3.5 重组质粒 pEASY-T1-CP的测序第37页
  3.6 菌落PCR及酶切鉴定重组质粒p CAMBIA2300-CP第37页
  3.7 双酶切鉴定重组质粒pCAMBIA2300-CP第37-38页
  3.8 菌落PCR鉴定转化pCAMBIA2300-CP的根癌农杆菌第38-39页
4 讨论第39-40页
第二章“伽师”再生体系的建立第40-46页
1 材料、试剂与仪器第40-41页
  1.1 材料第40页
  1.2 主要仪器第40页
  1.3 试剂及配制第40-41页
    1.3.1 主要试剂第40-41页
    1.3.2 配制方法第41页
2 方法第41-42页
  2.1 再生体系的建立第41-42页
    2.1.1 无菌苗的获得第41页
    2.1.2 诱导不定芽第41页
    2.1.3 AgNO3对不定芽诱导的影响第41-42页
    2.1.4 不定芽伸长第42页
    2.1.5 不定芽生根第42页
    2.1.6 再生植株的驯化及移栽第42页
  2.2 项目测定第42页
3 结果第42-45页
3.16-BA对不定芽诱导的影响第42页
  3.2 AgNO3对不定芽诱导的影响第42-43页
  3.3 不定芽的伸长和生根第43-44页
  3.4 练苗及移栽第44-45页
4 讨论第45-46页
第三章 WMV CP基因的转化第46-53页
1 材料、试剂与仪器第46-47页
  1.1 材料第46页
  1.2 试剂、培养基及配制第46-47页
    1.2.1 主要试剂第46页
    1.2.2 培养基第46-47页
    1.2.3 配制方法第47页
  1.3 主要仪器第47页
2 方法第47-50页
  2.1 遗传转化第47-48页
    2.1.1 无菌苗的获得第47-48页
    2.1.2 预培养第48页
    2.1.3 农杆菌浸染及共培养第48页
    2.1.4 不定芽伸长第48页
    2.1.5 不定芽生根第48页
    2.1.6 驯化及移栽第48页
  2.2 转基因植株的鉴定第48-50页
    2.2.1 植物DNA的提取第48-49页
    2.2.2 PCR鉴定转基因植株第49-50页
3 结果第50-52页
  3.1 烟草的遗传转化第50-51页
  3.2 甜瓜的遗传转化第51页
  3.3 PCR鉴定转基因烟草及甜瓜第51-52页
4 讨论第52-53页
第四章 转基因烟草生理生化分析第53-60页
1 材料、试剂与仪器第53页
  1.1 材料第53页
  1.2 试剂及配制第53页
2 方法第53-56页
  2.1 三种酶活性测定第53-55页
    2.1.1 总蛋白的提取第53-54页
    2.1.2 SOD酶活性测定第54页
    2.1.3 POD活性测定第54-55页
    2.1.4 CAT活性测定第55页
  2.2 T1代烟草遗传分析第55-56页
3 结果第56-59页
  3.1 T0代烟草抗氧化酶类的检测第56-57页
  3.2 T1代烟草遗传分析第57-59页
4 讨论第59-60页
第三部分 结论第60-61页
参考文献第61-68页
致谢第68-69页
攻读学位期间取得的研究成果第69-70页

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