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利用酵母双杂交技术筛选与南方番茄病毒互作的功能基因

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利用酵母双杂交技术筛选与南方番茄病毒互作的功能基因
论文目录
 
摘要第1-7页
Abstract第7-12页
常用中英文符号缩写词表第12-13页
引言第13-14页
第一章 文献综述第14-24页
  1.1 番茄病毒病的概述第14-15页
    1.1.1 番茄病毒病的危害第14页
    1.1.2 番茄病毒病害症状第14页
    1.1.3 番茄病毒病的主要分布及种类第14-15页
  1.2 南方番茄病毒的概述第15-17页
    1.2.1 南方番茄病毒的发现第15-16页
    1.2.2 基因组结构和组成第16-17页
    1.2.3 症状表型第17页
    1.2.4 传播途径第17页
    1.2.5 寄主范围第17页
  1.3 酵母双杂交系统第17-20页
    1.3.1 酵母双杂交系统的基本原理第17-19页
    1.3.2 酵母双杂交系统的主要特点第19页
    1.3.3 酵母双杂交系统的优点第19-20页
    1.3.4 酵母双杂交系统的局限性及改进第20页
  1.4 利用酵母双杂研究植物蛋白与病毒蛋白相互作用的研究进展第20-23页
    1.4.1 植物蛋白与病毒外壳蛋白之间的相互作用第20-21页
    1.4.2 植物蛋白与病毒运动蛋白之间旳相互作用第21-22页
    1.4.3 植物蛋白与病毒复制酶类蛋白间的相互作用第22-23页
  1.5 研究意义第23-24页
第二章 诱饵载体pSos-STV CP、pSos-STV RdRp的构建及自激活检测第24-36页
  2.1 材料第24页
    2.1.1 菌株和质粒载体第24页
    2.1.2 常用试剂及试剂盒第24页
    2.1.3 常用试剂及培养基的配制第24页
    2.1.4 主要仪器设备第24页
  2.2 方法第24-30页
    2.2.1 诱饵载体pSos-STV CP、pSos-STV RdRp的构建第24-28页
    2.2.2 诱饵载体pSos-STV CP、pSos-STV RdRp的自激活验证第28-30页
  2.3 结果与分析第30-35页
    2.3.1 STV CP,RdRp基因的扩增第30-31页
    2.3.2 诱饵载体pSos重组质粒的双酶切鉴定第31页
    2.3.3 酵母菌株cdc25H表型的验证第31-32页
    2.3.4 诱饵蛋白STV CP、RdRp的自激活验证第32-35页
  2.4 小结与讨论第35-36页
第三章 酵母双杂交筛选与STV RdRp、CMV 2b互作的基因第36-47页
  3.1 材料第36页
    3.1.1 菌株和质粒载体第36页
    3.1.2 主要试剂及试剂盒第36页
  3.2 方法第36-38页
    3.2.1 共转化筛选与STV RdRp、CMV 2b互作的基因第36-37页
    3.2.2 阳性克隆的鉴定第37-38页
  3.3 结果及分析第38-46页
    3.3.1 共转化结果第38-40页
    3.3.2 与STV RdRp互作的阳性克隆质粒的双酶切结果第40-44页
    3.3.3 与CMV 2b互作的阳性克隆质粒的酶切结果第44-45页
    3.3.4 阳性克隆的测序及序列比对分析第45-46页
  3.4 小结与讨论第46-47页
第四章 候选基因的回转酵母验证第47-55页
  4.1 材料第47页
    4.1.1 菌株和质粒载体第47页
    4.1.2 主要试剂及试剂盒第47页
  4.2 方法第47-51页
    4.2.1 回转验证相关载体的构建第47-50页
    4.2.2 GAL4酵母双杂交系统回转验证互作第50-51页
  4.3 结果与分析第51-54页
    4.3.1 相关基因的PCR扩增第51-52页
    4.3.2 相关T重组质粒的单酶切鉴定第52页
    4.3.3 相关酵母载体的双酶切鉴定第52-53页
    4.3.4 GAL4酵母双杂交系统验证互作第53-54页
  4.4 小结与讨论第54-55页
第五章 PT2基因的生物信息学分析及亚细胞定位研究第55-66页
  5.1 材料第55页
    5.1.1 菌株及载体第55页
    5.1.2 主要试剂及培养基第55页
    5.1.3 主要仪器设备第55页
  5.2 方法第55-60页
    5.2.1 PT2基因的生物信息学分析第55-56页
    5.2.2 PT2基因亚细胞定位载体的构建第56-58页
    5.2.3 亚细胞定位载体 35S:GFP-PT2电击转化农杆菌第58页
    5.2.4 菌落PCR鉴定第58-59页
    5.2.5 烟草的遗传转化第59页
    5.2.6 转基因烟草的鉴定第59-60页
    5.2.7 亚细胞定位的荧光观察第60页
  5.3 结果与分析第60-65页
    5.3.1 PT2的生物信息学分析第60-62页
    5.3.2 PT2基因的PCR扩增第62-63页
    5.3.3 亚细胞定位载体 35S:GFP-PT2的双酶切鉴定第63页
    5.3.4 转基因烟草的PCR检测第63-64页
    5.3.5 亚细胞定位的荧光观察第64-65页
  5.4 小结与讨论第65-66页
第六章 对STV感染新疆加工番茄的症状研究第66-72页
  6.1 材料第66页
    6.1.1 番茄种子来源第66页
    6.1.2 常用试剂及试剂盒第66页
  6.2 方法第66-68页
    6.2.1 番茄种子的种植第66页
    6.2.2 植物总RNA的提取第66-67页
    6.2.3 一步法RT-PCR检测第67-68页
    6.2.4 杂交育种第68页
  6.3 结果与分析第68-71页
    6.3.1 一步法RT-PCR检测结果第68-69页
    6.3.2 STV感染新疆加工番茄的症状表现第69-71页
  6.4 小结与讨论第71-72页
第七章 结论与讨论第72-75页
参考文献第75-84页
附录 常用试剂及培养基的配制第84-86页
致谢第86-87页
作者简介第87-88页
附件第88页

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