论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 缩略词及英汉对照表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1.1 RNA干扰技术的研究概述 | 第13-18页 |
| 1.1.1 RNA干扰现象的发现 | 第13页 |
| 1.1.2 RNA干扰的原理 | 第13-14页 |
| 1.1.3 RNAi作用过程相关的酶和蛋白质 | 第14-16页 |
| 1.1.4 RNA干扰技术的应用 | 第16-18页 |
| 1.2 Argonaute蛋白的研究概述 | 第18-21页 |
| 1.2.1 Argonaute蛋白家族的起源及分类 | 第18页 |
| 1.2.2 Argonaute蛋白家族的结构特点 | 第18-19页 |
| 1.2.3 AGO蛋白的细胞定位 | 第19页 |
| 1.2.4 Argonaute蛋白家族的国内外研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3 本课题的研究目的 | 第21页 |
| 1.4 本课题的技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 利用酵母双杂交技术验证SlAGO4A与PVY HC-Pro及CMV 2b相互作用 | 第22-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 主要仪器和设备 | 第22页 |
| 2.1.2 菌株，载体和试剂盒 | 第22页 |
| 2.1.3 常用试剂及培养基的配制 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 诱饵载体及目的载体构建 | 第23-26页 |
| 2.2.2 基因相互作用验证 | 第26-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-31页 |
| 2.3.1 PVY HC-Pro、CMV2b和SlAGO4A基因的扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.2 重组质粒的酶切鉴定 | 第28-30页 |
| 2.3.3 共转化 | 第30-31页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 番茄SlAGO4A基因的亚细胞定位 | 第33-45页 |
| 3.1 研究材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第33页 |
| 3.1.2 菌株和载体 | 第33页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第33-34页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第34页 |
| 3.1.5 培养基及试剂的配置 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-39页 |
| 3.2.1 载体构建 | 第34-36页 |
| 3.2.2 烟草的遗传转化 | 第36-38页 |
| 3.2.3 转基因烟草的PCR检测 | 第38-39页 |
| 3.3 结果和分析 | 第39-43页 |
| 3.3.1 SlAGO4A的PCR扩增 | 第39-40页 |
| 3.3.2 T克隆重组质粒酶切鉴定 | 第40页 |
| 3.3.3 35S:GFP-SlAGO4A酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3.4 菌落PCR鉴定 | 第41页 |
| 3.3.5 转基因烟草植株的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 3.3.6 SlAGO4A亚细胞定位 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第43-45页 |
| 第四章 SlAGO4A基因过表达及干扰转基因番茄植株的获得 | 第45-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第45页 |
| 4.1.2 实验载体 | 第45页 |
| 4.1.3 实验所需仪器设备 | 第45-46页 |
| 4.1.4 实验试剂及试剂盒 | 第46页 |
| 4.1.5 培养基及试剂的配置 | 第46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-54页 |
| 4.2.1 生物信息学分析 | 第46页 |
| 4.2.2 载体构建 | 第46-49页 |
| 4.2.3 加工番茄的遗传转化 | 第49-50页 |
| 4.2.4 转基因植株的检测 | 第50-51页 |
| 4.2.5 转基因番茄中SlAGO4A基因的表达量分析 | 第51-54页 |
| 4.3 结果与分析 | 第54-58页 |
| 4.3.1 SlAGO4A进化树构建 | 第54-55页 |
| 4.3.2 SlAGO4A及PIWI基因扩增 | 第55页 |
| 4.3.3 过表达及干扰载体构建 | 第55-56页 |
| 4.3.4 转基因番茄植株检测 | 第56-57页 |
| 4.3.5 Realtime PCR引物特异性检测 | 第57-58页 |
| 4.3.6 过表达转基因番茄植株中SlAGO4A基因的相对表达量分析 | 第58页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第58-60页 |
| 第五章 结论与展望 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 附录 常用试剂及培养基的配制 | 第67-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71-72页 |
| 附表 | 第72页 |
