论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 论文中常用缩写词英汉对照表 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-32页 |
| 1 动物性别控制 | 第17-20页 |
| 1.1 动物性别的起源和性别决定 | 第17页 |
| 1.2 动物性别控制的方法 | 第17-20页 |
| 2 Zfx基因家族与动物性别控制的渊源 | 第20-22页 |
| 2.1 Zfx基因家族简介 | 第20页 |
| 2.2 Zfx基因家族的问世 | 第20-21页 |
| 2.3 Zfx基因及其家族在性别鉴定和控制中的应用 | 第21-22页 |
| 3 动物性别控制相关的其他基因 | 第22-26页 |
| 3.1 SRY/Sry基因 | 第22-23页 |
| 3.2 Dmrt基因家族 | 第23-24页 |
| 3.3 Foxl2基因 | 第24页 |
| 3.4 Sox9基因家族 | 第24-25页 |
| 3.5 Gadd45基因家族 | 第25页 |
| 3.6 Sly/Slx基因家族 | 第25-26页 |
| 3.7 Gata基因家族 | 第26页 |
| 3.8 DAX1基因 | 第26页 |
| 4 基因修饰编辑技术 | 第26-28页 |
| 4.1 ZFN技术 | 第26-27页 |
| 4.2 TALEN技术 | 第27页 |
| 4.3 CRISPR技术 | 第27页 |
| 4.4 SGN技术 | 第27-28页 |
| 4.5 NgAgo RNA切割技术 | 第28页 |
| 5 RNA干扰技术及应用 | 第28-31页 |
| 5.1 RNAi的原理 | 第28-29页 |
| 5.2 RNAi的构建和应用 | 第29-30页 |
| 5.3 RNAi的介导途径的选择 | 第30页 |
| 5.4 RNAi在动物繁殖中的应用 | 第30-31页 |
| 6 问题与展望 | 第31-32页 |
| 第二章 试验研究 | 第32-59页 |
| 试验一 猪Zfx基因RNAi重组载体的构建 | 第32-39页 |
| 1 材料与方法 | 第32-36页 |
| 1.1 材料及仪器 | 第32-33页 |
| 1.2 方法 | 第33-36页 |
| 1.2.1 siRNA干扰片段的选择 | 第33-34页 |
| 1.2.2 靶向猪Zfx基因的shRNA寡核苷酸链的设计及合成 | 第34页 |
| 1.2.3 人工化学合成的寡聚核苷酸（ds oligo）的合链 | 第34-35页 |
| 1.2.4 质粒线性化酶切及重组构建和环状结构恢复 | 第35页 |
| 1.2.5 重组载体的原核表达和扩增 | 第35-36页 |
| 1.2.6 重组载体的测序鉴定 | 第36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-37页 |
| 2.1 siRNA的筛选 | 第36页 |
| 2.2 人工化学合成的寡聚核苷酸（ds oligo）的合链 | 第36页 |
| 2.3 重组载体的原核表达扩增及菌液测序鉴定 | 第36-37页 |
| 3 讨论与小结 | 第37-39页 |
| 3.1 讨论 | 第37-38页 |
| 3.1.1 siRNA筛选条件和设计原则 | 第37-38页 |
| 3.1.2 shRNA的筛选和设计 | 第38页 |
| 3.1.3 重组RNA干扰表达载体的连接转化 | 第38页 |
| 3.1.4 载体测序 | 第38页 |
| 3.1.5 干扰载体的优化 | 第38页 |
| 3.2 小结 | 第38-39页 |
| 试验二 RNAi试验干扰载体细胞水平的验证 | 第39-49页 |
| 1 材料与方法 | 第39-40页 |
| 1.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 2 试验方法 | 第40-45页 |
| 2.1 重组质粒的原核表达扩增及其富集纯化 | 第41页 |
| 2.2 猪睾丸组织的酶消化和生精细胞/支持细胞共培养体系的建立 | 第41-43页 |
| 2.2.1 实验动物样品采集 | 第41页 |
| 2.2.2 睾丸组织裂解和细胞分离培养所需的主要试剂的配制 | 第41-42页 |
| 2.2.3 猪睾丸生精细胞和支持细胞的分离及原代培养 | 第42-43页 |
| 2.3 干扰载体对生精细胞的转染和干扰 | 第43-44页 |
| 2.3.1 体外培养箱模拟细胞培养和营养物质的更换 | 第43页 |
| 2.3.2 干扰载体转染体外培养的生精细胞 | 第43-44页 |
| 2.4 猪睾丸体外培养生精细胞Zfx基因的mRNA相对定量 | 第44-45页 |
| 2.4.1 猪睾丸生精细胞总RNA的提取及反转录 | 第44-45页 |
| 2.4.2 生精细胞总RNA的质量检测 | 第45页 |
| 2.4.3 生精细胞cDNA的质量检测 | 第45页 |
| 2.4.4 相对实时定量qRT-PCR检测猪睾丸生精细胞Zfx基因干扰前后mRNA表达水平 | 第45页 |
| 2.4.5 数据统计分析 | 第45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-47页 |
| 3.1 重组载体转染入生精细胞 | 第45-46页 |
| 3.2 细胞cDNA检测结果 | 第46-47页 |
| 3.3 干扰猪生精细胞Zfx基因在细胞水平的mRNA检测分析 | 第47页 |
| 4 讨论与小结 | 第47-49页 |
| 4.1 讨论 | 第48页 |
| 4.1.1 实验动物的选择 | 第48页 |
| 4.1.2 生精细胞的分离纯化 | 第48页 |
| 4.1.3 重组载体的验证 | 第48页 |
| 4.2 小结 | 第48-49页 |
| 试验三 重组载体的猪体内干扰试验 | 第49-55页 |
| 1 材料与方法 | 第49-50页 |
| 1.1 实验动物 | 第49页 |
| 1.2 主要试剂 | 第49页 |
| 1.3 主要仪器 | 第49-50页 |
| 1.4 体内干扰猪生精细胞Zfx基因试验 | 第50页 |
| 1.4.1 注射前的准备 | 第50页 |
| 1.4.2 注射试验 | 第50页 |
| 1.4.3 配种 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-53页 |
| 2.1 子代仔猪数据统计 | 第51-52页 |
| 2.1.1 注射质粒后，所有与配母猪产仔总体统计 | 第51页 |
| 2.1.2 第三次注射质粒后，子猪后代每月统计 | 第51-52页 |
| 2.2 Zfy基因mRNA表达水平检测 | 第52-53页 |
| 3 讨论与小结 | 第53-55页 |
| 3.1 讨论 | 第53-54页 |
| 3.1.1 重组载体的原核表达扩增和富集纯化 | 第53页 |
| 3.1.2 体内干扰注射间隔时间 | 第53页 |
| 3.1.3 重组载体动物体内性控效果分析 | 第53-54页 |
| 3.2 小结 | 第54-55页 |
| 试验四 注射重组载体对与配母猪繁殖性能影响的追踪检测 | 第55-59页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| 1.1 实验动物 | 第55页 |
| 1.2 主要仪器 | 第55页 |
| 1.3 主要耗材 | 第55-56页 |
| 1.4 主要方法 | 第56-57页 |
| 1.4.1 猪的采精和人工授精 | 第56页 |
| 1.4.2 与配母猪的分栏试验和追踪管理 | 第56页 |
| 1.4.3 母猪产仔护理及数据追踪 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57页 |
| 3 讨论与小结 | 第57-59页 |
| 3.1 讨论 | 第57-58页 |
| 3.1.1 注射重组载体对与配母猪繁殖性能的影响 | 第57-58页 |
| 3.1.2 猪Zfx基因性控干扰技术的优化 | 第58页 |
| 3.2 小结 | 第58-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68-69页 |
| 导师评阅表 | 第69页 |
