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重组鲨鱼血管抑制因子活性片段蛋白aSAIF纯化工艺及其抑制肿瘤机制研究

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重组鲨鱼血管抑制因子活性片段蛋白aSAIF纯化工艺及其抑制肿瘤机制研究
论文目录
 
摘要第1-4页
Abstract第4-9页
第一章 前言第9-22页
  · 肿瘤的血管生成第9-10页
  · 肿瘤血管生成抑制因子第10-11页
  · 鲨鱼血管生成抑制因子第11页
  · 鲨鱼软骨抗肿瘤活性成分及其相关机制第11-13页
    · 鲨鱼软骨活性物质对肿瘤新生血管的抑制作用第12页
    · 鲨鱼软骨活性物质对免疫功能的调节作用第12-13页
    · 鲨鱼软骨活性物质对肿瘤细胞的杀伤效应第13页
  · SUMO 融合蛋白系统第13-15页
    · 融合蛋白技术第13-14页
    · SUMO 蛋白简介第14页
    · SUMO 融合蛋白系统优势第14-15页
    · SUMO 融合蛋白系统应用第15页
  · 高效液相色谱技术及其应用第15-16页
  · 血管生成的相关信号通路第16-19页
    · VEGF-VEGFR 信号通路第16-17页
    · Ang-Tie 信号通路第17-18页
    · Dll4-Notch 信号通路第18-19页
  · 表达谱芯片技术及其应用第19-20页
  · 本研究主要内容及技术路线第20-22页
    · 研究内容第20-21页
    · 本研究技术路线第21-22页
第二章 实验材料及仪器第22-28页
  · 材料第22-26页
    · 细胞株、质粒及菌株第22页
    · 主要试剂与试剂盒第22-23页
    · 层析填料及 HPLC 高效液相色谱柱第23-24页
    · 常用缓冲液及配方第24-26页
  · 仪器及设备第26-28页
第三章 实验方法第28-40页
  · 工程菌 BL21/PET-3C/ASAIF-SUMO 发酵罐培养条件的优化第28-29页
    · 工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 的制备第28页
    · 发酵罐培养准备工作第28页
    · 工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 发酵罐培养生长曲线第28-29页
    · 工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 发酵罐培养条件优化第29页
  · ASAIF 蛋白中试纯化工艺摸索第29-33页
    · 菌体破碎上清液的获取第29页
    · Q Sepharose 线性洗脱梯度摸索第29-30页
    · Q Sepharose 分步洗脱梯度确立第30页
    · Q Sepharose 载量摸索第30页
    · Ni Sepharose FF 亲和层析第30-31页
    · 融合蛋白 His6-SUMO-aSAIF 的 sumo 酶切第31页
    · aSAIF 蛋白的纯化第31页
    · aSAIF 超滤脱盐及冻干第31-32页
    · BCA 法蛋白浓度测定第32页
    · 融合蛋白半定量灰度扫描第32页
    · SDS-PAGE 电泳第32-33页
  · HPLC 检测融合蛋白方法的建立第33-36页
    · 融合蛋白在不同介质上的高效液相色谱行为探索第33-36页
    · 融合蛋白 aSAIF-SUMO 特征洗脱峰鉴定第36页
    · 两种样品溶液下的融合蛋白检测第36页
    · 菌体破碎上清中融合蛋白的检测第36页
  · ASAIF 蛋白活性及功能鉴定第36-40页
    · HUVEC 细胞培养第36-37页
    · WST-8 增殖抑制实验第37页
    · 细胞凋亡及周期检测第37-38页
    · 人源基因表达谱芯片检测第38-39页
    · IPA 生物信息学分析第39-40页
第四章 结果与分析第40-67页
  · 工程菌 BL21/PET-3C/ASAIF-SUMO 发酵罐培养条件的优化第40-42页
    · 工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 生长曲线第40-41页
    · 工程菌 BL21/PET-3C/aSAIF-SUMO 发酵罐培养条件优化第41-42页
  · 重组 ASAIF 中试纯化工艺摸索第42-50页
    · 融合蛋白 His6-SUMO-aSAIF 的纯化第42-46页
    · 融合蛋白 His6-SUMO-aSAIF 的酶切第46-48页
    · ASAIF 纯化工艺得率分析第48-50页
  · HPLC 检测融合蛋白方法的建立第50-59页
    · 融合蛋白 aSAIF-SUMO 在不同介质上的高效液相色谱行为探索第50-55页
    · 融合蛋白 aSAIF-SUMO 特征洗脱峰鉴定第55-56页
    · 两种样品溶液下的融合蛋白检测情况第56-58页
    · 菌体破碎上清中融合蛋白的检测情况第58-59页
  · ASAIF 蛋白活性及功能鉴定第59-67页
    · WST-8 细胞增殖实验第59页
    · 细胞凋亡及周期检测第59-61页
    · 人源全基因表达谱芯片检测第61-67页
第五章 讨论第67-73页
  · 工程菌高密度发酵优化策略第67-68页
  · ASAIF 纯化工艺优化策略第68-69页
  · ASAIF 纯化工艺得率分析第69页
  · HPLC 检测融合蛋白方法的建立第69-70页
  · ASAIF 抑制血管生成机制初探第70-73页
第六章 总结和展望第73-74页
  · 总结第73页
  · 展望第73-74页
参考文献第74-80页
附录第80-81页
硕士期间发表论文第81-82页
致谢第82页

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