论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 文献综述 | 第12-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| H5N1 亚型禽流感病毒HA1基因的克隆与原核表达 | 第18-55页 |
| 1 材料与方法 | 第18-34页 |
| · AIV 毒株 | 第18页 |
| · 工程菌和质粒 | 第18页 |
| · 酶类与主要试剂(盒) | 第18页 |
| · 免疫诊断试剂 | 第18页 |
| · 主要培养基与溶液的配制 | 第18-22页 |
| · 主要仪器 | 第22页 |
| · 禽流感病毒HA1 基因的克隆 | 第22-27页 |
| · 引物设计与合成 | 第22页 |
| · 病毒RNA 的提取 | 第22-23页 |
| · HA1 基因第一链cDNA 的合成 | 第23页 |
| · RT-PCR 扩增 | 第23页 |
| · RT-PCR 产物的回收与纯化 | 第23-24页 |
| · RT-PCR 产物的单酶切鉴定 | 第24页 |
| · RT-PCR 产物与pMD18-T 载体的连接 | 第24-25页 |
| · 感受态细胞的制备 | 第25页 |
| · 连接产物的转化 | 第25-26页 |
| · 重组克隆质粒的提取与鉴定 | 第26-27页 |
| · 禽流感病毒HA1 基因的序列测定与生物信息学分析 | 第27页 |
| · HA1 基因序列与同源性比较 | 第27页 |
| · HA1 基因编码区蛋白的生物信息学分析 | 第27页 |
| · 原核表达重组质粒pET-32a-HA1 和pGEX-4T-1-HA1 的构建与鉴定 | 第27-31页 |
| · 引物设计与合成 | 第28页 |
| · HA1 基因的PCR 扩增与PCR 产物的回收纯化 | 第28页 |
| · PCR 纯化产物与表达质粒的双酶切 | 第28-29页 |
| · 双酶切产物的回收与纯化 | 第29页 |
| · HA1 基因与表达质粒的连接 | 第29页 |
| · 连接产物的转化 | 第29页 |
| · 重组质粒的鉴定 | 第29-31页 |
| · 重组质粒pET-32a-HA1 和pGEX-4T-1-HA1 的原核表达 | 第31-34页 |
| · 重组质粒pET-32a-HA1 的诱导表达 | 第31页 |
| · 重组质粒pGEX-4T-1-HA1 的诱导表达 | 第31页 |
| · 表达产物的鉴定 | 第31-32页 |
| · 最佳诱导时间的优化 | 第32页 |
| · 表达产物的定位与可溶性分析 | 第32-34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-50页 |
| · HA1 基因的RT-PCR 扩增与单酶切鉴定 | 第34-35页 |
| · HA1 基因的克隆与鉴定 | 第35页 |
| · HA1 基因序列测定与生物信息学分析 | 第35-42页 |
| · 原核表达重组质粒的构建与鉴定 | 第42-44页 |
| · 重组质粒表达蛋白的鉴定 | 第44-46页 |
| · 最佳诱导时间的确定 | 第46-48页 |
| · 表达产物的定位与可溶性分析 | 第48-50页 |
| 3 讨论 | 第50-55页 |
| · 禽流感病毒安徽分离株总RNA 的提取 | 第50页 |
| · 禽流感病毒安徽分离株 HA1 基因序列分析 | 第50-51页 |
| · 禽流感病毒安徽分离株HA1 蛋白的结构预测 | 第51-52页 |
| · 表达载体的选择 | 第52-53页 |
| · 宿主菌的选择 | 第53页 |
| · 禽流感病毒安徽分离株HA1 蛋白的原核表达 | 第53-54页 |
| · 信号肽序列对HA1 基因原核表达的影响 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-60页 |
| 附录 | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |
