论文目录 | |
| 摘要 | 第1-4页 |
| Summary | 第4-5页 |
| 缩略语表 | 第5-10页 |
| 第一篇 文献综述 | 第10-20页 |
| 1 流感病毒 | 第10页 |
| 2 禽流感病毒及其结构 | 第10-14页 |
| 2.1 血凝素HA蛋白 | 第11页 |
| 2.2 神经氨酸酶NA蛋白 | 第11-12页 |
| 2.3 病毒聚合酶蛋白PB2、PB1、PA | 第12页 |
| 2.4 核衣壳蛋白NP | 第12-13页 |
| 2.5 基质蛋白M | 第13页 |
| 2.6 非结构蛋白NS | 第13-14页 |
| 3 流感病毒的抗病毒机制及非结构蛋白NS1的作用 | 第14-16页 |
| 3.1 细胞抗病毒机制的拮抗作用 | 第14-15页 |
| 3.2 NS1拮抗RNA干扰（RNAi）途径 | 第15页 |
| 3.3 NS1参与细胞凋亡 | 第15-16页 |
| 3.4 NS1蛋白调控树突状细胞的成熟 | 第16页 |
| 4 流感病毒的复制 | 第16-18页 |
| 4.1 受体结合并细胞进入 | 第17页 |
| 4.2 膜融合和脱壳 | 第17-18页 |
| 4.3 RNA复制和翻译 | 第18页 |
| 4.4 病毒装配和释放 | 第18页 |
| 5. 研究目的与意义 | 第18-20页 |
| 第二篇 试验部分 | 第20-50页 |
| 第一章 表达Strep标签的重组H5N6亚型禽流感病毒的构建 | 第20-34页 |
| 1 材料与方法 | 第20-27页 |
| 1.1 细胞、毒株和实验动物 | 第20页 |
| 1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 1.4 RNA的提取与病毒RNA的反转录 | 第21页 |
| 1.5 引物设计与合成 | 第21-22页 |
| 1.6 病毒各基因片段的PCR扩增与回收 | 第22-23页 |
| 1.7 连接、转化和阳性菌的筛选 | 第23-24页 |
| 1.8 携带Strep标签的NS1重组质粒的构建 | 第24页 |
| 1.9 八个重组阳性质粒中提 | 第24-25页 |
| 1.10 293T细胞的传代与培养 | 第25页 |
| 1.11 病毒拯救与纯化 | 第25-26页 |
| 1.12 获救病毒的序列鉴定 | 第26页 |
| 1.13 拯救病毒F5代以内Strep标签遗传稳定性鉴定 | 第26-27页 |
| 1.14 病毒感染MDCK细胞的生长曲线 | 第27页 |
| 1.15 病毒感染小鼠致病性试验 | 第27页 |
| 1.16 病毒滴定 | 第27页 |
| 2 结果 | 第27-32页 |
| 2.1 HN109各基因片段的扩增及重组质粒的构建 | 第27-28页 |
| 2.2 病毒拯救与鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3 拯救病毒F5代以内Strep标签的遗传稳定性鉴定 | 第29-30页 |
| 2.4 病毒感染MDCK细胞的生长曲线 | 第30-31页 |
| 2.5 病毒感染小鼠致病性试验 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-34页 |
| 第二章 鸭肺原代上皮细胞的分离与鉴定 | 第34-43页 |
| 1 材料与方法 | 第35-37页 |
| 1.1 SPF鸭胚与鸭肺脏组织来源 | 第35页 |
| 1.2 试剂 | 第35页 |
| 1.3 主要仪器 | 第35页 |
| 1.4 鸭肺原代上皮细胞的分离 | 第35-36页 |
| 1.5 鸭肺原代上皮细胞的原代培养 | 第36页 |
| 1.6 鸭肺原代上皮细胞的纯化传代培养 | 第36页 |
| 1.7 免疫荧光鉴定鸭肺原代上皮细胞 | 第36-37页 |
| 1.8 鸭肺原代上皮细胞生长曲线的测定 | 第37页 |
| 2 结果 | 第37-41页 |
| 2.1 鸭肺原代上皮细胞的分离与原代培养 | 第37-38页 |
| 2.2 鸭肺原代上皮细胞的纯化传代培养 | 第38-39页 |
| 2.3 免疫荧光鉴定鸭肺原代上皮细胞 | 第39-40页 |
| 2.4 鸭肺原代上皮细胞生长曲线的测定 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 与NS1-strep互作的鸭宿主蛋白鉴定 | 第43-50页 |
| 1 材料和方法 | 第43-47页 |
| 1.1 主要试剂 | 第43页 |
| 1.2 主要仪器 | 第43页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第43-44页 |
| 1.4 与NS1-Strep互作的宿主蛋白复合物的纯化 | 第44-45页 |
| 1.5 SDS-PAGE银染分析与NS1-strep互作的鸭宿主蛋白 | 第45-46页 |
| 1.6 Western blotting分析与NS1-strep互作的鸭宿主蛋白 | 第46页 |
| 1.7 质谱分析与 NS1-strep 互作的鸭宿主蛋白 | 第46-47页 |
| 2 结果 | 第47-48页 |
| 2.1 SDS-PAGE银染分析与NS1-strep互作的鸭宿主蛋白 | 第47页 |
| 2.2 Western blot分析与NS1-strep互作的鸭宿主蛋白 | 第47-48页 |
| 2.3 质谱鉴定纯化后的蛋白质复合物 | 第48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 全文总结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59-60页 |
| 导师简介 | 第60-61页 |
