论文目录 | |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词与中英对照 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 柑橘黄化脉明病毒研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.1 发生与分布 | 第12页 |
| 1.1.2 寄主范围与症状 | 第12页 |
| 1.1.3 分子生物学特性 | 第12-13页 |
| 1.1.4 检测方法 | 第13页 |
| 1.2 植物细胞程序性死亡研究进展 | 第13-22页 |
| 1.2.1 PCD的特征 | 第14页 |
| 1.2.2 PCD的检测技术 | 第14-17页 |
| 1.2.2.1 形态学检测 | 第14-15页 |
| 1.2.2.2 染色质DNA断裂检测方法 | 第15-17页 |
| 1.2.2.3 其他检测方法 | 第17页 |
| 1.2.3 PCD的调控机制 | 第17-22页 |
| 1.2.3.1 基因调控 | 第17-18页 |
| 1.2.3.2 蛋白调控 | 第18-19页 |
| 1.2.3.3 信号调控 | 第19-22页 |
| 第二章 引言 | 第22-24页 |
| 2.1 研究背景及意义 | 第22-23页 |
| 2.2 技术路线 | 第23-24页 |
| 第三章 CYVCV在尤力克柠檬叶片中的分布 | 第24-36页 |
| 3.1 材料 | 第24-25页 |
| 3.1.1 供试材料 | 第24页 |
| 3.1.2 取样方法 | 第24页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 3.1.4 主要试剂 | 第25页 |
| 3.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 3.2.1 总RNA提取 | 第25-26页 |
| 3.2.2 引物的合成 | 第26页 |
| 3.2.3 cDNA的合成 | 第26-28页 |
| 3.2.3.1 普通RT-PCR cDNA的合成 | 第26-27页 |
| 3.2.3.2 实时荧光定量RT-PCR cDNA的合成 | 第27-28页 |
| 3.2.4 普通RT-PCR检测 | 第28页 |
| 3.2.5 实时荧光定量RT-PCR检测CYVCV含量 | 第28-29页 |
| 3.2.6 尤力克柠檬叶片的DTBIA检测 | 第29页 |
| 3.2.7 LRWhite树脂样品包埋块制作 | 第29-30页 |
| 3.2.8 免疫荧光标记抗体标记及荧光显微镜观察 | 第30页 |
| 3.3 结果与分析 | 第30-34页 |
| 3.3.1 总RNA质量检测 | 第30-31页 |
| 3.3.2 不同时期尤力克柠檬叶片CYVCV含量测定 | 第31页 |
| 3.3.3 感病尤力克柠檬叶片的DTBIA检测 | 第31-32页 |
| 3.3.4 CYVCV在尤力克柠檬叶片中的免疫荧光定位 | 第32-34页 |
| 3.3.4.1 CYVCV在侧脉中荧光定位 | 第32-33页 |
| 3.3.4.2 CYVCV在主脉中荧光定位 | 第33-34页 |
| 3.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第四章 CYVCV诱导尤力克柠檬细胞程序性死亡鉴定 | 第36-52页 |
| 4.1 材料 | 第36-39页 |
| 4.1.1 供试材料 | 第36页 |
| 4.1.2 取样方法 | 第36页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第36页 |
| 4.1.4 主要试剂（盒） | 第36页 |
| 4.1.5 常用储备液及缓冲液 | 第36-39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39-42页 |
| 4.2.1 TUNEL原位末端标记检测 | 第39-40页 |
| 4.2.2 Spurr树脂样品制备固定及包埋 | 第40页 |
| 4.2.3 切片步骤 | 第40页 |
| 4.2.4 半薄切片染色 | 第40-41页 |
| 4.2.5 超薄切片染色 | 第41页 |
| 4.2.6 感病不同时期叶片DNA ladder检测 | 第41-42页 |
| 4.2.6.1 DNA的提取 | 第41页 |
| 4.2.6.2 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第41-42页 |
| 4.3 实验结果 | 第42-50页 |
| 4.3.1 TUNEL原位末端标记检测 | 第42-46页 |
| 4.3.1.1 CYVCV胁迫下不同时期尤力克柠檬叶片的TUNEL检测 | 第42-44页 |
| 4.3.1.2 CYVCV胁迫下尤力克柠檬不同部位的TUNEL检测 | 第44-46页 |
| 4.3.2 CYVCV侵染后柑橘叶片的超微结构变化 | 第46-50页 |
| 4.3.2.1 普通光学显微镜观察 | 第46-47页 |
| 4.3.2.2 叶绿体病变 | 第47-48页 |
| 4.3.2.3 线粒体病变 | 第48-49页 |
| 4.3.2.4 细胞核病变 | 第49-50页 |
| 4.3.3 DNA ladder的检测 | 第50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 尤力克柠檬PCD相关基因与代谢酶活性变化 | 第52-64页 |
| 5.1 材料 | 第52-53页 |
| 5.1.1 供试材料 | 第52页 |
| 5.1.2 取样方法 | 第52页 |
| 5.1.3 主要试剂（盒） | 第52页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第52-53页 |
| 5.2 方法 | 第53-57页 |
| 5.2.1 柑橘总RNA的提取 | 第53页 |
| 5.2.2 第一链cDNA合成 | 第53页 |
| 5.2.3 引物的筛选与设计 | 第53页 |
| 5.2.4 RT-PCR扩增与克隆鉴定 | 第53-54页 |
| 5.2.4.1 RT-PCR扩增 | 第53页 |
| 5.2.4.2 PCR产物的克隆与测序 | 第53-54页 |
| 5.2.5 定量PCR反应 | 第54页 |
| 5.2.6 酶活力测定 | 第54-56页 |
| 5.2.6.1 酶粗提液的提取 | 第54-55页 |
| 5.2.6.2 CAT活性的测定 | 第55页 |
| 5.2.6.3 POD酶活性的测定 | 第55页 |
| 5.2.6.4 SOD酶活性的测定 | 第55页 |
| 5.2.6.5 类Caspase-3 蛋白酶活性的测定 | 第55-56页 |
| 5.2.7 丙二醛含量的测定 | 第56-57页 |
| 5.3 结果与分析 | 第57-62页 |
| 5.3.1 各基因引物的扩展效率和特异性分析 | 第57页 |
| 5.3.2 CYVCV胁迫下PCD相关基因定量的差异表达分析 | 第57-59页 |
| 5.3.3 CYVCV胁迫下不同时期Caspase3like活性变化 | 第59页 |
| 5.3.4 CYVCV胁迫下不同时期MDA活性变化 | 第59-60页 |
| 5.3.5 CYVCV胁迫下不同时期抗氧化酶活性变化 | 第60-62页 |
| 5.4 讨论 | 第62-64页 |
| 第六章 主要结论、创新点和展望 | 第64-66页 |
| 6.1 主要结论 | 第64页 |
| 6.2 创新点 | 第64页 |
| 6.3 展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 攻读学位期间发表论文及参加科研项目 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
