论文目录 | |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 背景简介 | 第10页 |
| 1.2 甘薯的生产与应用 | 第10页 |
| 1.3 类胡萝卜素的功能及其生物合成 | 第10-15页 |
| 1.3.1 类胡萝卜素的保健功能 | 第10-11页 |
| 1.3.2 类胡萝卜素的生物合成 | 第11-12页 |
| 1.3.3 类胡萝卜素合成途径中的部分关键酶 | 第12-15页 |
| 1.4 植物中类胡萝卜素的合成调控 | 第15-16页 |
| 1.4.1 生物合成途径中有关基因的调控 | 第15页 |
| 1.4.2 转录水平上调控 | 第15页 |
| 1.4.3 其他调控方式 | 第15-16页 |
| 1.5 植物滞绿基因SGR | 第16-18页 |
| 第2章 绪论 | 第18-22页 |
| 2.1 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 2.2 研究范围和内容 | 第19页 |
| 2.3 技术路线 | 第19-22页 |
| 第3章 材料与方法 | 第22-40页 |
| 3.1 植物材料 | 第22页 |
| 3.2 菌株和质粒 | 第22页 |
| 3.3 仪器和设备 | 第22页 |
| 3.4 试剂盒及试剂 | 第22-23页 |
| 3.5 常规方法介绍 | 第23-28页 |
| 3.5.1 RNA与DNA的提取 | 第23-24页 |
| 3.5.2 DNA产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第24-25页 |
| 3.5.3 质粒的提取 | 第25页 |
| 3.5.4 目的条带的回收 | 第25页 |
| 3.5.5 目的片段与克隆载体T连接 | 第25-26页 |
| 3.5.6 大肠杆菌感受态细胞的制备（CaCl2法） | 第26页 |
| 3.5.7 连接反应物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第26-27页 |
| 3.5.8 农杆菌感受态制备及转化 | 第27页 |
| 3.5.9 重组子的鉴定、测序 | 第27页 |
| 3.5.10 烟草叶片的瞬时转化 | 第27-28页 |
| 3.6 IbPSY和IbSGR基因cDNA的克隆与分析 | 第28-30页 |
| 3.6.1 从甘薯总RNA合成第一链cDNA | 第28页 |
| 3.6.2 目的基因的克隆 | 第28-29页 |
| 3.6.3 IbPSY和IbSGR基因的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 3.7 qPCR反应 | 第30-31页 |
| 3.7.1 荧光定量cDNA的合成 | 第30页 |
| 3.7.2 qPCR反应 | 第30-31页 |
| 3.8 IbPSY和IbSGR蛋白的亚细胞定位 | 第31-34页 |
| 3.8.1 亚细胞定位载体的构建 | 第31-33页 |
| 3.8.2 烟草叶片的瞬时转化及激光共聚焦显微镜观察 | 第33-34页 |
| 3.9 双分子荧光互补（BiFC） | 第34页 |
| 3.9.1 BiFC载体构建 | 第34页 |
| 3.9.2 BiFC技术方法 | 第34页 |
| 3.10 IbPSY和IbSGR在大肠杆菌中表达 | 第34-37页 |
| 3.10.1 载体构建 | 第34-35页 |
| 3.10.2 大肠杆菌原核表达 | 第35-36页 |
| 3.10.3 HPLC检测工程菌中的β-胡萝卜素 | 第36-37页 |
| 3.11 转基因拟南芥材料的获得 | 第37-40页 |
| 3.11.1 超表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 3.11.2 拟南芥的转化 | 第38-39页 |
| 3.11.3 拟南芥阳性植株的筛选 | 第39页 |
| 3.11.4 转基因拟南芥中叶绿素和类胡萝卜素含量的测定 | 第39-40页 |
| 第4章 结果与分析 | 第40-58页 |
| 4.1 IbSGRcDNA、IbPSY cDNA的获得和生物信息学分析 | 第40-46页 |
| 4.1.1 IbSGR和IbPSY基因的获得 | 第40页 |
| 4.1.2 生物信息学分析 | 第40-41页 |
| 4.1.3 分子进化树与多重氨基酸序列比对分析 | 第41-46页 |
| 4.2 IbSGR蛋白与Ib PSY蛋白的亚细胞定位分析 | 第46-47页 |
| 4.3 IbPSY和IbSGR的功能验证 | 第47-54页 |
| 4.3.1 携带不同质粒的大肠杆菌BL21(DE3)的生长情况分析 | 第47-48页 |
| 4.3.2 HPLC检测颜色互补工程菌中的β-胡萝卜素 | 第48-49页 |
| 4.3.3 超量表达IbPSY拟南芥中类胡萝卜素含量的分析 | 第49-51页 |
| 4.3.4 IbSGR在甘薯组织中的相对表达量 | 第51-52页 |
| 4.3.5 超量表达IbSGR拟南芥中叶绿素含量的分析 | 第52-54页 |
| 4.4 IbSGR与IbPSY关系的初步探索 | 第54-58页 |
| 4.4.1 IbSGR与IbPSY的双分子荧光互补（BiFC） | 第54-55页 |
| 4.4.2 IbSGR在产β-胡萝卜素工程菌中的表达 | 第55-56页 |
| 4.4.3 HPLC检测产β-胡萝卜素工程菌中的β-胡萝卜素 | 第56-57页 |
| 4.4.4 超量表达IbSGR拟南芥中类胡萝卜素含量的分析 | 第57-58页 |
| 第5章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 5.1 结论与讨论 | 第58-59页 |
| 5.2 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 附录 缩略词表 | 第68-70页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
