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猪用生物发酵床垫料中微生物群落多样性变化及芽孢杆菌分离与鉴定

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猪用生物发酵床垫料中微生物群落多样性变化及芽孢杆菌分离与鉴定
论文目录
 
摘要第1-10页
ABSTRACT第10-12页
縮略语表第12-13页
第一章 前言第13-26页
  1 引言第13-16页
    · 我国畜禽养殖业污染的现状第13-15页
      · 水源污染第13-14页
      · 土壤污染第14页
      · 大气污染第14页
      · 生物污染第14-15页
    · 畜禽养殖业污染的防控对策第15-16页
      · 营养调控减排法第15页
      · 生物技术法第15-16页
        · 厌氧发酵法第15-16页
        · 好氧堆肥法第16页
      · 物理化学法第16页
  2 生物发酵床养猪技术第16-20页
    · 生物发酵床技术研究进展第16-18页
    · 生物发酵床的优势第18-19页
      · 解决养猪污染,实现环保养殖第18页
      · 提高猪的福利,改善猪肉品质第18-19页
      · 节省饲料,提高生产性能第19页
      · 省工节本,降低养殖成本第19页
      · 变废为宝,改善农村环境第19页
    · 生物发酵床存在的问题第19-20页
  3 微生物多样性的研究方法第20-23页
    · 传统微生物分析方法第20页
    · 现代微生物分析方法第20-23页
      · 基于PCR技术的微生物分析方法第20-22页
      · 基于生物标记的微生物分析方法第22页
      · 基于生物碳源利用差异的微生物分析方法第22页
      · 基于核酸杂交的微生物分析方法第22-23页
  4 PCR-变性梯度凝胶电泳技术第23-24页
    · PCR-DGGE技术的原理第23-24页
    · PCR-DGGE技术在研究微生物多样性中的应用第24页
  5 研究的目的与意义第24-26页
第二章 材料和方法第26-45页
  1 试验材料第26-31页
    · 培养基第26-27页
    · 常规试剂药品、酶及试剂盒第27-28页
      · 常用的试剂药品第27页
      · 酶及试剂盒第27-28页
    · PCR反应引物第28页
    · 常用缓冲液及试剂的配制第28-30页
    · 主要的试验仪器设备第30-31页
  2 实验方法第31-45页
    · 样品采集及垫料表观特征分析第31页
      · 样品采集第31页
      · 垫料表观特征分析第31页
    · 芽孢杆菌的分离、筛选及鉴定第31-37页
      · 芽孢杆菌的分离纯化第31-32页
      · 高效芽孢杆菌的筛选第32页
        · 淀粉酶检测第32页
        · 蛋白酶检测第32页
      · 高效芽孢杆菌的传统鉴定第32-33页
        · 高效芽孢杆菌的形态观察第32-33页
        · 高效芽孢杆菌的生理生化鉴定第33页
      2.2.4 高效芽孢杆菌的16S rRNA分子生物学鉴定第33-37页
        · 高效芽孢杆菌基因组DNA的提取第33-34页
        · 提取基因组DNA的浓度测定和质量检测第34页
        2.2.4.3 16S rRNA基因PCR扩增和检测第34页
        · PCR产物的回收纯化第34-35页
        · 纯化PCR产物与载体连接第35页
        · 感受态细胞制备(CaCl_2法)第35-36页
        · 连接产物的转化第36页
        · 阳性克隆子的鉴定和测序第36-37页
    · PCR-DGGE第37-45页
      · 微生物总基因组DNA的提取、纯化第37-38页
        · 生物发酵床垫料样品的前处理第37页
        · 微生物总基因组DNA的提取第37-38页
        · 微生物总基因组DNA的纯化第38页
      · 微生物总基因组DNA浓度测定和质量检测第38页
      2.3.3 16S rRNA基因V6~V8区PCR扩增和检测第38-39页
      · PCR-DGGE第39-42页
        · 垂直梯度凝胶制备第39-41页
        · 平行梯度凝胶制备第41-42页
        · DGGE电泳第42页
        · 染色及拍照第42页
      2.3.5 Quantity One软件分析DGGE图谱第42-43页
      · 条带回收、克隆、测序第43-45页
        · 目的片段的回收第43页
        · 回收目的片段的PCR扩增和检测第43页
        · PCR产物的回收纯化第43页
        · 纯化PCR产物与载体连接第43页
        · 感受态细胞制备(CaCl_2法)第43页
        · 连接产物的转化第43-44页
        · 阳性克隆子的鉴定和测序第44页
        · Blast比对分析第44-45页
第三章 结果与分析第45-62页
  1 样品采集及垫料表观特征分析第45-46页
    · 样品采集第45页
    · 垫料表观特征分析第45-46页
  2 芽孢杆菌的分离、筛选及鉴定第46-50页
    · 芽孢杆菌的分离纯化第46页
    · 高效芽孢杆菌的筛选第46-47页
      · 淀粉酶检测第46页
      · 蛋白酶检测第46-47页
    · 高效芽孢杆菌的传统鉴定第47-48页
      · 高效芽孢杆菌的形态观察第47-48页
      · 高效芽孢杆菌的生理生化鉴定第48页
    2.4 高效芽孢杆菌的16S rRNA分子生物学鉴定第48-50页
      · 高效芽孢杆菌基因组DNA第48-49页
      2.4.2 16S rRNA基因PCR扩增第49页
      · PCR产物克隆鉴定第49-50页
  3 PCR-DGGE第50-62页
    · 微生物总基因组DNA第50页
    3.2 16S rRNA基因V6~V8区PCR扩增第50-51页
    · PCR-DGGE第51-53页
      · 垂直DGGE第51页
      · 平行DGGE第51-53页
    3.4 Quantity One软件分析DGGE图谱第53-57页
    · 条带回收、克隆、测序第57-62页
第四章 讨论第62-66页
  1 芽孢杆菌的分离和鉴定第62页
  2 芽孢杆菌功能探讨第62-63页
  3 生物发酵床垫料中微生物总基因组DNA的提取第63-64页
  4 PCR-DGGE技术研究微生物的16S rRNA第64页
  5 猪用生物发酵床垫料中微生物群落多样性变化第64-66页
第五章 小结第66-68页
  1 本研究所取得的成果第66-67页
    · 高效芽孢杆菌的筛选与鉴定第66页
    · DGGE分子生物学分析第66-67页
  2 下一步值得研究的工作第67-68页
参考文献第68-77页
致谢第77 页

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