论文目录 | |
摘要 | 第1-7
页 |
Abstract | 第7-14
页 |
第一章 引言 | 第14-22
页 |
· SIV的基本概况 | 第14-19
页 |
· SIV的生物学活性 | 第15
页 |
· SIV的基因组结构及编码蛋白 | 第15-16
页 |
· SIV的复制 | 第16-17
页 |
· SIV的抗原性变异 | 第17
页 |
· SIV种间传播的分子机理 | 第17-18
页 |
· SI的公共卫生 | 第18
页 |
· SI的流行现状 | 第18-19
页 |
· SIV血清学诊断方法 | 第19-21
页 |
· SI血凝和血凝抑制试验 | 第19-20
页 |
· SI神经氨酸酶抑制试验 | 第20
页 |
· SI中和试验 | 第20
页 |
· 琼脂凝胶扩散试验 | 第20
页 |
· 免疫荧光法 | 第20-21
页 |
· 酶联免疫吸附试验 | 第21
页 |
· 本试验研究的目的和意义 | 第21-22
页 |
第二章 H3N2亚型SIV遗传演化分析 | 第22-37
页 |
· 材料 | 第22-23
页 |
· 试验用病毒株 | 第22
页 |
· 鸡胚 | 第22
页 |
· 主要试剂 | 第22-23
页 |
· 主要仪器 | 第23
页 |
· 菌种 | 第23
页 |
· 引物设计 | 第23
页 |
· 方法 | 第23-28
页 |
· 病毒分离及有限稀释克隆纯化 | 第23-24
页 |
· 红细胞凝集(HA)试验 | 第24
页 |
· 红细胞凝集抑制(HI)试验 | 第24
页 |
· 病毒核酸的提取 | 第24
页 |
· 基因的RT-PCR扩增 | 第24-25
页 |
· PCR产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第25
页 |
· PCR产物回收和纯化 | 第25-26
页 |
· 大肠杆菌感受态DH5α的制备 | 第26
页 |
· 目的基因DNA产物的连接与转化 | 第26
页 |
· 阳性重组质粒的筛选 | 第26
页 |
· 重组质粒的PCR鉴定 | 第26-27
页 |
· 质粒DNA纯化 | 第27
页 |
· 质粒DNA测序 | 第27-28
页 |
· 序列拼接与分析 | 第28
页 |
· 结果与分析 | 第28-36
页 |
· 五株H3N2亚型病毒表面基因RT-PCR产物 | 第28-29
页 |
· 毒株SW/GD/9/05内部基因RT-PCR产物 | 第29
页 |
· 五株病毒HA基因的阳性克隆 | 第29-30
页 |
· 五株病毒HA基因编码区核苷酸序列同源性比较 | 第30
页 |
· 与五株病毒八个基因片段同源性最高的毒株 | 第30
页 |
· SW/GD/9/05与参考病毒株HA基因编码区核苷酸序列绘制的系统进化树 | 第30-31
页 |
· SW/GD/9/05的PB2基因与参考病毒株PB2基因编码区核苷酸序列绘制的系统进化树 | 第31-32
页 |
· SW/GD/9/05的NP基因与参考病毒株NP基因编码区核苷酸序列绘制的系统进化树 | 第32-33
页 |
· 五株病毒HA1蛋白氨基酸序列的比较 | 第33-36
页 |
· 讨论 | 第36-37
页 |
第三章 H3N2亚型SIV HA1基因的原核表达与纯化 | 第37-49
页 |
· 材料 | 第37
页 |
· 病毒株 | 第37
页 |
· SPF鸡 | 第37
页 |
· 主要试剂 | 第37
页 |
· 主要仪器 | 第37
页 |
· 质粒和菌种 | 第37
页 |
· 引物设计 | 第37
页 |
· 方法 | 第37-43
页 |
· 抗体效价(HI)测定 | 第38
页 |
· 重组表达质粒的构建 | 第38-40
页 |
· 重组表达质粒的鉴定 | 第40-41
页 |
· HA1蛋白在大肠杆菌中表达 | 第41
页 |
· 表达产物的SDS-PAGE分析 | 第41-42
页 |
· Western-blot免疫印迹检测 | 第42
页 |
· HA1融合蛋白的纯化 | 第42-43
页 |
· 结果 | 第43-47
页 |
· HI结果分析 | 第43
页 |
· HA1基因的RT-PCR | 第43-44
页 |
· 重组质粒pET-HA1的鉴定 | 第44-46
页 |
· 重组蛋白SDS-PAGE电泳 | 第46
页 |
· 重组蛋白的Western blot检测 | 第46-47
页 |
· pET-HAI融合表达蛋白的纯化 | 第47
页 |
· 讨论 | 第47-49
页 |
第四章 H3N2亚型SIV重组HA1蛋白间接ELISA检测方法的建立 | 第49-63
页 |
· 材料 | 第49-50
页 |
· 抗原 | 第49
页 |
· 血清和酶标抗体 | 第49
页 |
· ELISA相关溶液 | 第49-50
页 |
· 主要仪器和设备 | 第50
页 |
· 间接ELISA方法的建立 | 第50-52
页 |
· 间接ELISA操作程序 | 第50
页 |
· 不同抗原包被浓度和血清稀释度试验 | 第50
页 |
· 不同封闭液的对比试验 | 第50-51
页 |
· 不同封闭时间的对比试验 | 第51
页 |
· 一抗最佳作用时间的试验 | 第51
页 |
· 酶标二抗稀释倍数和作用时间试验 | 第51
页 |
· 间接ELISA方法阴阳性临界值的确定 | 第51
页 |
· 重复性试验 | 第51-52
页 |
· 与HI检测方法比较 | 第52
页 |
· 交叉试验 | 第52
页 |
· 结果 | 第52-61
页 |
· 抗原最适包被浓度及血清最佳稀释度的确定 | 第52-54
页 |
· 封闭液的选择 | 第54-55
页 |
· 最适封闭时间的确定 | 第55-56
页 |
· 一抗最佳作用时间 | 第56-57
页 |
· 酶标抗体最适稀释浓度的确定 | 第57-58
页 |
· 酶标抗体最适作用时间的确定 | 第58-59
页 |
· 阴阳性判定标准的确定 | 第59-60
页 |
· 重复性试验 | 第60-61
页 |
· 交叉试验 | 第61
页 |
· 与HI比较试验 | 第61
页 |
· 讨论 | 第61-63
页 |
第五章 结论 | 第63-64
页 |
参考文献 | 第64-68
页 |
附录 | 第68-77
页 |
致谢 | 第77-78
页 |
作者简介 | 第78页 |