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H3N2亚型猪流感病毒进化分析及重组HA1蛋白间接ELISA诊断方法的建立

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H3N2亚型猪流感病毒进化分析及重组HA1蛋白间接ELISA诊断方法的建立
论文目录
 
摘要第1-7 页
Abstract第7-14 页
第一章 引言第14-22 页
  · SIV的基本概况第14-19 页
    · SIV的生物学活性第15 页
    · SIV的基因组结构及编码蛋白第15-16 页
    · SIV的复制第16-17 页
    · SIV的抗原性变异第17 页
    · SIV种间传播的分子机理第17-18 页
    · SI的公共卫生第18 页
    · SI的流行现状第18-19 页
  · SIV血清学诊断方法第19-21 页
    · SI血凝和血凝抑制试验第19-20 页
    · SI神经氨酸酶抑制试验第20 页
    · SI中和试验第20 页
    · 琼脂凝胶扩散试验第20 页
    · 免疫荧光法第20-21 页
    · 酶联免疫吸附试验第21 页
  · 本试验研究的目的和意义第21-22 页
第二章 H3N2亚型SIV遗传演化分析第22-37 页
  · 材料第22-23 页
    · 试验用病毒株第22 页
    · 鸡胚第22 页
    · 主要试剂第22-23 页
    · 主要仪器第23 页
    · 菌种第23 页
    · 引物设计第23 页
  · 方法第23-28 页
    · 病毒分离及有限稀释克隆纯化第23-24 页
    · 红细胞凝集(HA)试验第24 页
    · 红细胞凝集抑制(HI)试验第24 页
    · 病毒核酸的提取第24 页
    · 基因的RT-PCR扩增第24-25 页
    · PCR产物的琼脂糖凝胶电泳第25 页
    · PCR产物回收和纯化第25-26 页
    · 大肠杆菌感受态DH5α的制备第26 页
    · 目的基因DNA产物的连接与转化第26 页
    · 阳性重组质粒的筛选第26 页
    · 重组质粒的PCR鉴定第26-27 页
    · 质粒DNA纯化第27 页
    · 质粒DNA测序第27-28 页
    · 序列拼接与分析第28 页
  · 结果与分析第28-36 页
    · 五株H3N2亚型病毒表面基因RT-PCR产物第28-29 页
    · 毒株SW/GD/9/05内部基因RT-PCR产物第29 页
    · 五株病毒HA基因的阳性克隆第29-30 页
    · 五株病毒HA基因编码区核苷酸序列同源性比较第30 页
    · 与五株病毒八个基因片段同源性最高的毒株第30 页
    · SW/GD/9/05与参考病毒株HA基因编码区核苷酸序列绘制的系统进化树第30-31 页
    · SW/GD/9/05的PB2基因与参考病毒株PB2基因编码区核苷酸序列绘制的系统进化树第31-32 页
    · SW/GD/9/05的NP基因与参考病毒株NP基因编码区核苷酸序列绘制的系统进化树第32-33 页
    · 五株病毒HA1蛋白氨基酸序列的比较第33-36 页
  · 讨论第36-37 页
第三章 H3N2亚型SIV HA1基因的原核表达与纯化第37-49 页
  · 材料第37 页
    · 病毒株第37 页
    · SPF鸡第37 页
    · 主要试剂第37 页
    · 主要仪器第37 页
    · 质粒和菌种第37 页
    · 引物设计第37 页
  · 方法第37-43 页
    · 抗体效价(HI)测定第38 页
    · 重组表达质粒的构建第38-40 页
    · 重组表达质粒的鉴定第40-41 页
    · HA1蛋白在大肠杆菌中表达第41 页
    · 表达产物的SDS-PAGE分析第41-42 页
    · Western-blot免疫印迹检测第42 页
    · HA1融合蛋白的纯化第42-43 页
  · 结果第43-47 页
    · HI结果分析第43 页
    · HA1基因的RT-PCR第43-44 页
    · 重组质粒pET-HA1的鉴定第44-46 页
    · 重组蛋白SDS-PAGE电泳第46 页
    · 重组蛋白的Western blot检测第46-47 页
    · pET-HAI融合表达蛋白的纯化第47 页
  · 讨论第47-49 页
第四章 H3N2亚型SIV重组HA1蛋白间接ELISA检测方法的建立第49-63 页
  · 材料第49-50 页
    · 抗原第49 页
    · 血清和酶标抗体第49 页
    · ELISA相关溶液第49-50 页
    · 主要仪器和设备第50 页
  · 间接ELISA方法的建立第50-52 页
    · 间接ELISA操作程序第50 页
    · 不同抗原包被浓度和血清稀释度试验第50 页
    · 不同封闭液的对比试验第50-51 页
    · 不同封闭时间的对比试验第51 页
    · 一抗最佳作用时间的试验第51 页
    · 酶标二抗稀释倍数和作用时间试验第51 页
    · 间接ELISA方法阴阳性临界值的确定第51 页
    · 重复性试验第51-52 页
    · 与HI检测方法比较第52 页
    · 交叉试验第52 页
  · 结果第52-61 页
    · 抗原最适包被浓度及血清最佳稀释度的确定第52-54 页
    · 封闭液的选择第54-55 页
    · 最适封闭时间的确定第55-56 页
    · 一抗最佳作用时间第56-57 页
    · 酶标抗体最适稀释浓度的确定第57-58 页
    · 酶标抗体最适作用时间的确定第58-59 页
    · 阴阳性判定标准的确定第59-60 页
    · 重复性试验第60-61 页
    · 交叉试验第61 页
    · 与HI比较试验第61 页
  · 讨论第61-63 页
第五章 结论第63-64 页
参考文献第64-68 页
附录第68-77 页
致谢第77-78 页
作者简介第78页

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