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重组大流行流感疫苗的构建及制备工艺研究

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重组大流行流感疫苗的构建及制备工艺研究
论文目录
 
摘要第1-9页
Abstract第9-15页
缩略语第15-16页
第一章 禽流感疫苗研究进展第16-22页
  引言第16页
  1 禽流感病毒简介第16-17页
  2 流感疫苗的类型第17-18页
    · 全病毒疫苗第17页
    · 裂解疫苗第17页
    · 毒粒亚单位疫苗第17-18页
  3 禽流感疫苗研究进展第18页
  4 新型疫苗载体--昆虫杆状病毒载体第18-20页
  5 疫苗制备及检测技术介绍第20-22页
    · 区带离心第20-21页
    · 血凝试验第21-22页
第二章 实验方案设计第22-24页
  1 研究目的和意义第22页
  2 研究内容第22-23页
  3 实验基本流程第23-24页
    · 重组杆状病毒的构建第23页
    · 禽流感疫苗制备工艺第23-24页
第三章 重组病毒的构建第24-36页
  1 材料与试剂第24-25页
    · 材料第24页
    · 试剂第24页
    · 主要试剂配制第24-25页
  2 实验方法第25-31页
    · 细胞培养与冻存、复苏第25-26页
    · 重组转移载体pFastBacHTb-gp64-HA 的构建第26-27页
    · 重组Bacmid- gp64-HA 的构建第27-30页
    · 重组Bacmid 通过脂质体介导法感染家蚕BmN 细胞第30页
    · 重组病毒vBmgp64-HA PCR 鉴定第30页
    · 重组蛋白gp64-HA 在家蚕BmN 细胞中的表达和鉴定第30-31页
  3 结果与分析第31-35页
    · 重组转移载体pFastBacHTb-gp64-HA 的鉴定第31-32页
    · 重组Bacmid- gp64-HA 的 PCR 鉴定第32页
    · 重组病毒vBmgp64-HA 的PCR 鉴定第32-33页
    · HA 蛋白在在家蚕细胞中的表达与鉴定第33-34页
    · HA 蛋白在在家蚕细胞中的血凝活性鉴定第34-35页
  4 讨论第35-36页
第四章 逐级离心生产工艺第36-44页
  1 材料与试剂第36-37页
    · 材料的获得第36页
    · 试剂第36页
    · 主要溶液配制第36-37页
    · 实验设备第37页
  2 方法第37-40页
    · 实验前准备工作第37页
    · 匀浆第37页
    · 低速离心第37页
    · 高速离心第37-38页
    · 超速离心第38页
    · 区带离心第38-39页
    · 超滤除糖第39页
    · 样品活性检测第39-40页
    · 样品蛋白浓度测定第40页
  3 结果与分析第40-42页
    · 工艺各个步骤样品的血凝活性和蛋白浓度检测第40-42页
  4 讨论第42-44页
第五章 硫酸铵分级盐析分离油脂和杂蛋白工艺初探第44-51页
  1 材料与试剂第44页
    · 材料的获得第44页
    · 试剂第44页
  2 方法第44-47页
    · 硫酸铵分级沉淀条件的摸索第44-46页
    · 血凝试验第46页
    · SDS-PAGE 检测第46-47页
    · Western blotting 检测第47页
  3 结果与分析第47-49页
    · 样品血凝实验结果第47-49页
    · SDS-PAGE 检测、Western blotting 检测结果第49页
  4 讨论第49-51页
第六章 硫酸铵分级盐析分离油脂和杂蛋白工艺第51-63页
  1 材料与试剂第51-52页
    · 材料的获得第51页
    · 试剂第51页
    · 主要溶液配制第51页
    · 实验设备第51-52页
  2第52-56页
    · 实验前准备工作第52页
    · 匀浆第52页
    · 低速离心第52页
    · 高速离心第52页
    · 硫酸铵分级沉淀蛋白第52-53页
    · 超滤除盐第53页
    · 区带离心第53-54页
    · 超滤脱糖第54页
    · 样品活性检测第54-55页
    · 样品蛋白浓度测定第55页
    · SDS-PAGE 和Western blotting 检测第55-56页
  3 结果与分析第56-61页
    · 工艺各个步骤样品的血凝活性和蛋白浓度检测第56-61页
  4 讨论第61-63页
第七章 膜抽滤、两次区带离心去除杂蛋白工艺初探第63-68页
  1 材料与试剂第63页
    · 材料的获得第63页
    · 试剂第63页
  2 工艺摸索第63-64页
    · 抽滤处理第63页
    · 两次区带离心与一次区带离心比较第63-64页
    · 超滤脱糖与透析脱糖比较第64页
  3 结果与分析第64-66页
  4 讨论第66-68页
第八章 改进后的生产工艺第68-79页
  1 材料与试剂第68-69页
    · 材料的获得第68页
    · 试剂第68页
    · 主要溶液配制第68-69页
    · 实验设备第69页
  2 方法第69-74页
    · 实验前准备工作第69页
    · 匀浆第69页
    · 低速离心第69页
    · 高速离心第69-70页
    · 硫酸铵分级沉淀蛋白第70页
    · 超滤除盐第70页
    · 第一次区带离心第70-71页
    · 第二次区带离心第71-72页
    · 透析除糖第72页
    · 样品活性检测第72-73页
      · 1%鸡红细胞悬液的制备第72页
      · 血凝试验第72-73页
    · 样品蛋白浓度测定第73页
    · SDS-PAGE 和Western blotting 检测第73-74页
  3 结果与分析第74-78页
    · 工艺优化效果分析第74-76页
    · 工艺的稳定性实验分析第76-78页
  4 讨论第78-79页
第九章 基于家蚕多角体蛋白融合的Bm SMG9 蛋白高效表达及快速纯化研究第79-91页
  1. 材料和方法第79-83页
    · 材料第79-80页
    · 方法第80-83页
  2. 结果与分析第83-89页
    · 生物信息学分析第83-85页
    · 重组载体的构建第85页
    · 重组蛋白的表达与纯化第85-86页
    · 酶切后纯化结果第86-87页
    · TEV 酶酶切结果及鉴定第87-88页
    · 酶切后目的蛋白的回收第88页
    · 家蚕五龄幼虫各组织中BmSMG9 基因的荧光定量PCR 数据结果第88-89页
  3. 讨论第89-91页
总结第91-93页
参考文献第93-98页
致谢第98 页

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