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藤黄微球菌过氧化氢酶发酵条件优化、诱变育种及其基因的克隆、表达与纯化

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藤黄微球菌过氧化氢酶发酵条件优化、诱变育种及其基因的克隆、表达与纯化
论文目录
 
摘要第1-9 页
ABSTRACT第9-21 页
1 引言第21-33 页
  · 过氧化氢酶的研究背景及依据第21-29 页
    · 活性氧简介第21-22 页
    · 过氧化氢第22-24 页
    · 过氧化氢酶简介第24-25 页
    · CAT的结构特点和功能第25-26 页
    · CAT的类型划分和功能第26-28 页
    · CAT的应用现状第28-29 页
    · CAT的研究进展第29 页
  · 藤黄微球菌(Micrococcus luteus)第29-31 页
  · 立题背景及意义第31-32 页
  · 课题研究内容第32-33 页
2 藤黄微球菌过氧化氢酶发酵条件和酶活特性第33-55 页
  · 材料与方法第33-43 页
    · 菌株第33 页
    · 主要仪器第33-34 页
    · 主要试剂及配制第34-36 页
    · 培养基第36-37 页
    · 分析方法第37-39 页
    · 实验方法第39-43 页
  · 结果第43-54 页
    · 菌落形态第43 页
    · 超声破碎条件的优化第43-45 页
    · 酶活测定第45-47 页
    · 发酵条件优化第47-53 页
    · 诱变育种第53-54 页
  · 讨论第54-55 页
3 藤黄微球菌过氧化氢酶基因原核表达载体的构建第55-81 页
  · 材料与方法第55-65 页
    · 菌株第55 页
    · 质粒第55-57 页
    · 主要试剂及配制第57-58 页
    · 培养基第58 页
    · 实验方法第58-65 页
  · 结果第65-74 页
    · M.luteus形态特征及镜下结构第65-66 页
    · M.luteus基因组提取结果第66 页
    · CAT基因的PCR扩增结果第66 页
    · Ampicillin及X-gal平板筛选阳性TA克隆结果第66 页
    · 重组克隆质粒pMD18-CAT的双酶切鉴定结果第66-68 页
    · 胶回收酶切后的CAT片段和表达载体pProEx-HTa第68 页
    · 重组表达质粒pProExHTa-CAT(P-CAT)的双酶切鉴定结果第68-69 页
    · CAT基因的测序结果第69-74 页
  · 讨论第74-81 页
    · 高GC含量PCR扩增的特点第74-75 页
    · TA克隆载体的特点第75-76 页
    · 感受态细胞的制备第76 页
    · CAT目的蛋白的氨基酸序列分析第76-81 页
4 藤黄微球菌过氧化氢酶基因在大肠杆菌中的表达及纯化第81-101 页
  · 材料与方法第81-94 页
    · 材料第81-85 页
    · 实验方法第85-94 页
  · 结果第94-99 页
    · SDS-PAGE检测CAT融合蛋白的表达第94-95 页
    · CAT融合蛋白小量纯化第95-96 页
    · CAT融合蛋白大量纯化第96-97 页
    · 蛋白复性结果第97 页
    · CAT酶活测定第97 页
    · CAT的pH稳定性第97-98 页
    · CAT的温度稳定性第98-99 页
  · 讨论第99-101 页
    · 大肠杆菌pProEx-HTa表达系统第99 页
    · CAT融合蛋白的表达第99-100 页
    · 离心法亲和层析纯化CAT融合蛋白第100 页
    · 基因重组工程菌与藤黄微球菌酶活比较第100-101 页
5 大肠杆菌生产pProExHTa-CAT的摇瓶发酵工艺研究第101-117 页
  · 试剂第101-104 页
    · 菌株及培养基第101 页
    · 主要试剂第101 页
    · 影响工程菌生长和目的蛋白表达的因素第101-104 页
  · 试验方法第104-108 页
    · 基因工程菌生长曲线第104 页
    · 基因工程菌发酵条件优化第104-107 页
    · 正交试验优化发酵因素第107 页
    · 发酵罐试验第107-108 页
  · 结果与讨论第108-116 页
    · 工程菌DH5α/pProExHTa-CAT的生长曲线第108 页
    · Bradford标准蛋白曲线建立第108-109 页
    · 诱导温度工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响第109 页
    · 诱导时机对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响第109-110 页
    · 诱导表达时间对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响第110 页
    · IPTG浓度对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响第110 页
    · 初始pH值对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响第110-111 页
    · 装液量对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响第111 页
    · 摇床转速对菌体生长和pProExHTa-CAT表达的影响第111-112 页
    · 接种量对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响第112-113 页
    · 种子菌龄对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响第113 页
    · 正交试验确定最佳发酵条件第113-115 页
    · 优化条件下大肠杆菌DH5α/pProExHTa-CAT的培养第115-116 页
  · 小结第116-117 页
全文总结第117-118 页
参考文献第118-124 页
附件第124-128 页
致谢第128-129 页
攻读学位期间发表的学位论文及专利申请第129 页

本篇论文共129页,点击这进入下载页面
 
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