论文目录 | |
摘要 | 第1-9
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ABSTRACT | 第9-21
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1 引言 | 第21-33
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· 过氧化氢酶的研究背景及依据 | 第21-29
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· 活性氧简介 | 第21-22
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· 过氧化氢 | 第22-24
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· 过氧化氢酶简介 | 第24-25
页 |
· CAT的结构特点和功能 | 第25-26
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· CAT的类型划分和功能 | 第26-28
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· CAT的应用现状 | 第28-29
页 |
· CAT的研究进展 | 第29
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· 藤黄微球菌(Micrococcus luteus) | 第29-31
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· 立题背景及意义 | 第31-32
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· 课题研究内容 | 第32-33
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2 藤黄微球菌过氧化氢酶发酵条件和酶活特性 | 第33-55
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· 材料与方法 | 第33-43
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· 菌株 | 第33
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· 主要仪器 | 第33-34
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· 主要试剂及配制 | 第34-36
页 |
· 培养基 | 第36-37
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· 分析方法 | 第37-39
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· 实验方法 | 第39-43
页 |
· 结果 | 第43-54
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· 菌落形态 | 第43
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· 超声破碎条件的优化 | 第43-45
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· 酶活测定 | 第45-47
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· 发酵条件优化 | 第47-53
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· 诱变育种 | 第53-54
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· 讨论 | 第54-55
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3 藤黄微球菌过氧化氢酶基因原核表达载体的构建 | 第55-81
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· 材料与方法 | 第55-65
页 |
· 菌株 | 第55
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· 质粒 | 第55-57
页 |
· 主要试剂及配制 | 第57-58
页 |
· 培养基 | 第58
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· 实验方法 | 第58-65
页 |
· 结果 | 第65-74
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· M.luteus形态特征及镜下结构 | 第65-66
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· M.luteus基因组提取结果 | 第66
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· CAT基因的PCR扩增结果 | 第66
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· Ampicillin及X-gal平板筛选阳性TA克隆结果 | 第66
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· 重组克隆质粒pMD18-CAT的双酶切鉴定结果 | 第66-68
页 |
· 胶回收酶切后的CAT片段和表达载体pProEx-HTa | 第68
页 |
· 重组表达质粒pProExHTa-CAT(P-CAT)的双酶切鉴定结果 | 第68-69
页 |
· CAT基因的测序结果 | 第69-74
页 |
· 讨论 | 第74-81
页 |
· 高GC含量PCR扩增的特点 | 第74-75
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· TA克隆载体的特点 | 第75-76
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· 感受态细胞的制备 | 第76
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· CAT目的蛋白的氨基酸序列分析 | 第76-81
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4 藤黄微球菌过氧化氢酶基因在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第81-101
页 |
· 材料与方法 | 第81-94
页 |
· 材料 | 第81-85
页 |
· 实验方法 | 第85-94
页 |
· 结果 | 第94-99
页 |
· SDS-PAGE检测CAT融合蛋白的表达 | 第94-95
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· CAT融合蛋白小量纯化 | 第95-96
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· CAT融合蛋白大量纯化 | 第96-97
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· 蛋白复性结果 | 第97
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· CAT酶活测定 | 第97
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· CAT的pH稳定性 | 第97-98
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· CAT的温度稳定性 | 第98-99
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· 讨论 | 第99-101
页 |
· 大肠杆菌pProEx-HTa表达系统 | 第99
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· CAT融合蛋白的表达 | 第99-100
页 |
· 离心法亲和层析纯化CAT融合蛋白 | 第100
页 |
· 基因重组工程菌与藤黄微球菌酶活比较 | 第100-101
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5 大肠杆菌生产pProExHTa-CAT的摇瓶发酵工艺研究 | 第101-117
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· 试剂 | 第101-104
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· 菌株及培养基 | 第101
页 |
· 主要试剂 | 第101
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· 影响工程菌生长和目的蛋白表达的因素 | 第101-104
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· 试验方法 | 第104-108
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· 基因工程菌生长曲线 | 第104
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· 基因工程菌发酵条件优化 | 第104-107
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· 正交试验优化发酵因素 | 第107
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· 发酵罐试验 | 第107-108
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· 结果与讨论 | 第108-116
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· 工程菌DH5α/pProExHTa-CAT的生长曲线 | 第108
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· Bradford标准蛋白曲线建立 | 第108-109
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· 诱导温度工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第109
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· 诱导时机对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第109-110
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· 诱导表达时间对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第110
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· IPTG浓度对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第110
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· 初始pH值对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第110-111
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· 装液量对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第111
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· 摇床转速对菌体生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第111-112
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· 接种量对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第112-113
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· 种子菌龄对工程菌生长和pProExHTa-CAT表达的影响 | 第113
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· 正交试验确定最佳发酵条件 | 第113-115
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· 优化条件下大肠杆菌DH5α/pProExHTa-CAT的培养 | 第115-116
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· 小结 | 第116-117
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全文总结 | 第117-118
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参考文献 | 第118-124
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附件 | 第124-128
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致谢 | 第128-129
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攻读学位期间发表的学位论文及专利申请 | 第129
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