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带有HIS标签的重组EIAV感染性分子克隆的构建

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带有HIS标签的重组EIAV感染性分子克隆的构建
论文目录
 
符号与缩略语第1-9 页
中文摘要第9-10 页
英文摘要第10-12 页
前言第12-15 页
第一部分 综述第15-35 页
  1 马传染性贫血概述第15 页
  2 马传染性贫血病病毒及其特性第15-21 页
  3 马传染性贫血病病毒分子生物学研究进展第21-35 页
第二部分 研究报告第35-63 页
  1 材料第35-38 页
    1.1 菌株与质粒第35-36 页
    1.2 试剂第36 页
    1.3 主要仪器第36 页
    1.4 引物与标记引物第36-37 页
    1.5 细胞与血清第37 页
    1.6 细胞培养用试剂的配制第37-38 页
    1.7 ELISA专用液第38 页
  2 方法第38-52 页
    2.1. SOEPCR法构建S2基因突变点第38-44 页
      2.1.1 质粒载体POK8266和BluescriptSKM(13-)质粒的酶切鉴定第39 页
      2.1.2 P1P2和P3P4片段的扩增第39 页
      2.1.3 SOE法扩增P1P4片段第39-40 页
      2.1.4 P1P4片段突变点的酶切鉴定第40-41 页
      2.1.5 P1P4片段纯化产物与载体质粒的酶切消化第41 页
      2.1.6 质粒载体BluescriptSK去磷酸化第41-42 页
      2.1.7 酶切产物的回收第42 页
      2.1.8 外源DNA片段与载体连接第42 页
      2.1.9 感受态细胞的制备第42-43 页
      2.1.10 转化第43 页
      2.1.11 质粒DNA的小量制备-碱裂解法第43 页
      2.1.12 阳性克隆的PCR鉴定第43-44 页
      2.1.13 序列测定第44 页
    2.2 马传贫病毒弱毒标记感染性分子克隆载体的构建第44-48 页
      2.2.1 人工合成标记物第44 页
      2.2.2 NspV酶切PB-P1P4突变载体及去磷酸化第44-45 页
      2.2.3 HIS-tag外源DNA片段与NspV酶切PB-P1P4突变载体连接第45 页
      2.2.4 转化、提质粒第45 页
      2.2.5 中间标记载体的鉴定第45-46 页
      2.2.6 ApaI酶切POK8266质粒载体及去磷酸化第46-48 页
      2.2.7 EIAV标记载体EIAV-p8.2-HIS的鉴定第48 页
    2.3 标记感染性分子克隆的检测与表达第48-52 页
      2.3.1 重组质粒EIAV-p8.2-HIS的纯化第48-49 页
      2.3.2 驴白细胞的制备第49 页
      2.3.3 转染第49-50 页
      2.3.4 HIS-EIAV病毒的检测第50-51 页
      2.3.5 HIS-EIAV病毒插入物的表达第51-52 页
  3 结果第52-60 页
    3.1 SOEPCR法构建S2基因突变点结果第52-55 页
      3.1.1 质粒载体POK8266和BluescriptSKM(13-)质粒的酶切鉴定结果第52 页
      3.1.2 SOE法扩增P1P4结果第52-54 页
      3.1.3 序列测定结果第54-55 页
    3.2 马传贫病毒弱毒标记感染性分子克隆载体的构建第55-56 页
      3.2.1 阳性克隆PB-P1P4的获得及鉴定第55-56 页
      3.2.2 序列测定结果第56 页
      3.2.3 突变标记载体POK8266-HIS的获得和鉴定第56 页
    3.3 标记感染性分子克隆的检测与表达第56-60 页
      3.3.1 重组质粒EIAV-p8.2的纯化结果第56-57 页
      3.3.2 转染结果第57-58 页
      3.3.3 连接T载体并测序第58-59 页
      3.3.4 EIAV-p8.2-his克隆毒感染驴白细胞的电镜检测结果第59-60 页
  4 讨论第60-63 页
结论第63-64 页
参考文献第64-75 页
附录第75-76 页

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