论文目录 | |
| 本论文的创新性研究工作 | 第1-9
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| 中文摘要 | 第9-10
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| ABSTRACT | 第10-11
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| 第一部分 文献综述及选题目的和意义 | 第11-19
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| 第一章 文献综述 | 第11-19
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| 1 肠炎沙门氏菌概述 | 第11-12
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| 2 RAPD概述及应用 | 第12
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| · RAPD概述 | 第12
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| · RAPD技术的应用 | 第12
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| 3 外膜蛋白的研究概况 | 第12-16
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| · 外膜蛋白(OMP)的致病作用 | 第13-14
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| · 外膜蛋白的基因调控 | 第14
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| · 外膜蛋白的免疫原性 | 第14-16
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| 4 信号肽与表达 | 第16-17
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| · 信号肽概述 | 第16
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| · 信号肽的结构 | 第16
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| · 信号肽在原核表达系统中的应用 | 第16-17
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| · 信号肽在真核表达系统中的应用 | 第17
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| 5 选题目的和意义 | 第17-19
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| 第二部分 实验研究 | 第19-56
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| 第二章 鸭源SE和S.typhi的RAPD分析 | 第19-35
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| 1 材料 | 第19-20
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| · 供试菌株 | 第19
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| · 试剂及其它供试材料 | 第19-20
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| · RAPD引物 | 第19
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| · RAPD常用试剂 | 第19-20
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| · 培养基 | 第20
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| · 主要仪器设备 | 第20
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| · 主要试剂的配制 | 第20
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| 2.方法 | 第20-24
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| · 细菌的培养 | 第20-21
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| · 基因组DNA的提取 | 第21
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| · 模板DNA的质量检测与浓度确定 | 第21-22
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| · 模板DNA完整性检测 | 第21
页 |
| · 模板DNA的纯度判定 | 第21
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| · 模板DNA浓度的测定与稀释 | 第21-22
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| · RAPD反应条件的优化与重复性试验 | 第22-23
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| · 模板与引物 | 第22
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| · 体系优化—完全交叉实验 | 第22-23
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| · 批内和批间重复性试验 | 第23
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| · 引物的筛选 | 第23
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| · RAPD扩增 | 第23
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| · 遗传相似性及聚类分析 | 第23-24
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| 3 结果 | 第24-30
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| · 模板DNA质量检测 | 第24
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| · RADP的条件优化及重复性验证 | 第24-26
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| · 扩增体系 | 第24-25
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| · 扩增程序 | 第25
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| · 重复性验证 | 第25-26
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| · 引物的筛选 | 第26
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| · RAPD多态性分析 | 第26-29
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| · 遗传相似性及聚类分析 | 第29-30
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| 4.讨论 | 第30-35
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| · 基因组DNA的提取 | 第30-31
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| · RAPD扩增条件的优化方法 | 第31
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| · RAPD引物的筛选 | 第31
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| · RAPD标记的稳定性 | 第31-32
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| · RAPD标记用于聚类分析的可靠性探讨 | 第32-33
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| · RAPD方法对细菌分类鉴别的可行性探讨 | 第33-35
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| 第三章 鸭源SE外膜蛋白基因克隆和原核表达 | 第35-56
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| 1 材料 | 第35-37
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| · 菌株 | 第35
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| · 实验血清 | 第35
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| · 主要药品及试剂 | 第35
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| · 主要溶液的配制 | 第35-37
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| · 琼脂糖凝胶电泳相关溶液 | 第35-36
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| · SDS-PAGE电泳常用液体 | 第36
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| · 免疫印迹相关试剂 | 第36-37
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| · 主要仪器 | 第37
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| 2 方法 | 第37-46
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| · 表达用引物的设计与合成 | 第37
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| · 细菌基因组的提取 | 第37-38
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| · 表达用引物的PCR | 第38
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| · OMP基因的序列测定 | 第38-39
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| · PyrobestTM DNA Polymerase对OMP基因的PCR扩增 | 第38-39
页 |
| · OMP基因的序列测定 | 第39
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| · OMP基因的T-载体克隆与鉴定 | 第39-40
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| · OMP基因的T-载体克隆 | 第39
页 |
| · 转化菌落的鉴定 | 第39-40
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| · OMP基因重组表达菌株的构建 | 第40-43
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| · 重组质粒pMD-18-T-OMP及pET-32a(+)的酶切与回收 | 第40-41
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| · 酶切回收产物pET-32a(+)与OMP片段的连接 | 第41
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| · 制备感受态细胞DH5 α及BL21 | 第41-42
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| · 重组表达质粒转化感受态细胞DH5 α | 第42
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| · 转化菌落的鉴定 | 第42
页 |
| · 重组表达菌株的构建 | 第42-43
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| · 重组表达质粒的小量诱导表达 | 第43-44
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| · 重组表达菌株的培养及表达 | 第43
页 |
| · SDA-PAGE电泳鉴定 | 第43-44
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| · 重组质粒表达条件的优化 | 第44
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| · 关于IPTG浓度的优化 | 第44
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| · 关于诱导时间的优化 | 第44
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| · 重组表达蛋白在宿主菌中的分布 | 第44
页 |
| · 重组蛋白的纯化 | 第44-45
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| · Western Blotting对重组蛋白的免疫原性研究 | 第45-46
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| 3 结果 | 第46-52
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| · OMP基因的PCR扩增 | 第46
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| · OMP基因的T载体克隆与鉴定 | 第46-47
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| · 重组质粒pMD-18-T-OMP的构建 | 第46
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| · 重组质粒pMD-18-T-OMP的酶切及PCR鉴定 | 第46-47
页 |
| · 重组表达质粒pET-32-OMP的构建及转化 | 第47-48
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| · 重组质粒pMD-18-T-OMPpET-32a(+)的酶切、回收 | 第47
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| · 表达质粒的重组与转化 | 第47
页 |
| · 重组表达质粒pET-32-OMP的酶切及PCR鉴定 | 第47-48
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| · 重组表达菌株的构建 | 第48
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| · 信号肽对表达的影响 | 第48-49
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| · 重组质粒pET-32-OMP(去信号肽)表达蛋白在宿主菌中的分布 | 第49
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| · 重组质粒表达条件的优化 | 第49-51
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| · IPTG浓度的优化 | 第49-50
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| · 诱导时间的优化 | 第50-51
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| · 表达蛋白的纯化 | 第51
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| · 免疫印迹结果 | 第51-52
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| 4 讨论 | 第52-56
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| · 表达用引物的设计 | 第52
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| · PCR | 第52
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| · T载体克隆 | 第52-53
页 |
| · 诱导表达 | 第53-54
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| · 信号肽对表达的影响 | 第54
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| · 重组表达蛋白的可溶性分析 | 第54-55
页 |
| · 表达条件的优化 | 第55
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| · 免疫印迹检测 | 第55-56
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| 第三部分 结论 | 第56-57
页 |
| 第四部分 参考文献 | 第57-63
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| 附录一 相似性系数矩阵 | 第63-64
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| 附录二 序列测定结果 | 第64-65
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| 致谢 | 第65-66
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| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第66
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