论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-5
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| ABSTRACT | 第5-7
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| 缩略词表 | 第7-12
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| 第一章 文献综述 | 第12-20
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| 1 疱疹病毒概述 | 第12
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| 2 鸭瘟概述 | 第12-16
页 |
| · 病原学概述 | 第13
页 |
| · 流行病学 | 第13-14
页 |
| · 临床症状 | 第14
页 |
| · 分子生物学概述: | 第14-16
页 |
| · α-疱疹病毒的基因组特征 | 第14
页 |
| · DPV研究进展 | 第14-15
页 |
| · 病毒基因的转录 | 第15
页 |
| · 病毒的装配和释放 | 第15
页 |
| · 病毒表达的蛋白质 | 第15-16
页 |
| 3 疱疹病毒UL33基因的研究进展 | 第16-18
页 |
| · 疱疹病毒UL33基因及其编码蛋白的特性 | 第16-17
页 |
| · UL33基因特性 | 第16
页 |
| · 编码蛋白的特性 | 第16-17
页 |
| · UL33编码蛋白的功能 | 第17-18
页 |
| · 在DNA裂解和包装中的作用 | 第17
页 |
| · 在形成完整衣壳中的作用 | 第17-18
页 |
| · 与pUL15、pUL28之间的作用 | 第18
页 |
| · 与pUL32之间的关系 | 第18
页 |
| 3.3.结语 | 第18
页 |
| 4 UL33基因在鸭瘟中的研究 | 第18-19
页 |
| 5 实验的目的及意义 | 第19-20
页 |
| 第二章 鸭瘟病毒UL33基因T克隆及生物信息学分析 | 第20-34
页 |
| 1 材料与方法 | 第20-24
页 |
| · 实验材料 | 第20-21
页 |
| · 菌株/毒株/载体 | 第20
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| · 实验动物 | 第20
页 |
| · 主要试剂及其配制 | 第20-21
页 |
| · 主要使用的信息分析软件 | 第21
页 |
| · 其他 | 第21
页 |
| · 实验方法 | 第21-24
页 |
| · 基因比对 | 第21
页 |
| · 病毒的增殖和病毒基因组DNA的提取 | 第21-22
页 |
| · DPV UL33基因的引物设计 | 第22
页 |
| · DPV UL33基因的PCR扩增 | 第22
页 |
| · PCR产物的回收 | 第22-23
页 |
| · 目的基因的连接及转化 | 第23-24
页 |
| · 菌落PCR鉴定 | 第24
页 |
| · DPV UL33基因序列测定 | 第24
页 |
| · DPV UL33基因的生物信息学分析 | 第24
页 |
| 2 结果 | 第24-31
页 |
| · DPV UL33基因的初步判定 | 第24-25
页 |
| · DPV UL33基因的克隆、测序 | 第25-31
页 |
| · 核酸序列和蛋白质序列基本分析 | 第26
页 |
| · 同源性分析 | 第26-28
页 |
| · 进化树分析 | 第28
页 |
| · 跨膜区、磷酸化位点、N-糖基化位点、信号肽和疏水性预测 | 第28-30
页 |
| · 二级和三级结构分析 | 第30-31
页 |
| 3.讨论 | 第31-34
页 |
| · UL33基因的引物设计 | 第31
页 |
| · 生物信息学 | 第31-32
页 |
| · 序列生物信息学 | 第32
页 |
| · 蛋白质生物信息学 | 第32
页 |
| · 蛋白功能预测 | 第32-34
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| 第三章 鸭瘟病毒UL33基因的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第34-49
页 |
| 1 材料与方法 | 第34-42
页 |
| · 实验材料 | 第34-36
页 |
| · 菌株/毒株/载体/实验动物 | 第34
页 |
| · 主要试剂及其配制 | 第34-35
页 |
| · 主要仪器设备 | 第35-36
页 |
| · 其它 | 第36
页 |
| · 实验方法 | 第36-42
页 |
| · UL33基因的亚克隆 | 第36-38
页 |
| · 重组蛋白的表达 | 第38-39
页 |
| · UL33表达蛋白的纯化 | 第39-40
页 |
| · 多克隆抗体的制备 | 第40-41
页 |
| · 免疫兔血清的Western Blotting检测 | 第41
页 |
| · 抗体IgG的粗提和纯化 | 第41-42
页 |
| 2 实验结果 | 第42-46
页 |
| · 重组表达质粒pET-32/UL33的构建 | 第42
页 |
| · 重组蛋白的诱导表达及条件优化 | 第42-44
页 |
| · 重组蛋白基本诱导表达 | 第42-43
页 |
| · 重组蛋白IPTG浓度诱导条件优化 | 第43-44
页 |
| · 重组蛋白表达时间条件优化 | 第44
页 |
| · UL33重组蛋白多克隆抗体琼扩结果 | 第44-45
页 |
| · 免疫印迹 | 第45
页 |
| · 抗体IgG的粗提和纯化 | 第45-46
页 |
| 3 讨论 | 第46-49
页 |
| · 外源基因融合表达的意义 | 第46-47
页 |
| · 表达载体和宿主菌 | 第47
页 |
| · 诱导表达 | 第47-48
页 |
| · 抗血清的制备 | 第48-49
页 |
| 第四章 鸭瘟病毒UL33基因转录时相分析和蛋白细胞定位 | 第49-68
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| 1 材料与方法 | 第49-54
页 |
| · 实验材料 | 第49-50
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| · 菌株/毒株/实验动物 | 第49
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| · 主要试剂及其配制 | 第49-50
页 |
| · 主要仪器设备 | 第50
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| · 试验方法 | 第50-54
页 |
| · 鸭胚成纤维细胞的培养和病毒接种 | 第50
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| · 转录时相 | 第50-52
页 |
| · 间接免疫荧光 | 第52-54
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| 2 实验结果 | 第54-64
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| · 转录时相 | 第54-61
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| · 引物验证 | 第54-55
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| · 内参引物检测样品 | 第55-56
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| · UL33设计引物检测样品 | 第56-57
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| · 数据统计分析 | 第57-61
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| · 蛋白细胞定位 | 第61-64
页 |
| · 间接免疫荧光检测DPV UL33基因产物 | 第61-62
页 |
| · 特异性实验 | 第62
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| · DPV UL33基因产物细胞定位的动态监测 | 第62-64
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| 3 讨论 | 第64-68
页 |
| · 转录时相 | 第64-66
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| · 转录时相的方法研究 | 第64-65
页 |
| · 关于DPV UL33基因的转录时相分析 | 第65-66
页 |
| · 蛋白细胞定位 | 第66-68
页 |
| · 蛋白定位的研究方法 | 第66
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| · 病毒感染DEF后UL33蛋白的细胞定位分析 | 第66-67
页 |
| · 关于病毒感染DEF后UL33蛋白细胞定位的时相分析 | 第67-68
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| 结论 | 第68-69
页 |
| 参考文献 | 第69-75
页 |
| 致谢 | 第75-76
页 |
| 作者简介以及攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第76
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