论文目录 | |
中文摘要 | 第1-6
页 |
Abstract | 第6-8
页 |
符号说明 | 第8-11
页 |
前言 | 第11-25
页 |
1 猪传染性胃肠炎和猪呼吸道冠状病毒概述 | 第11-13
页 |
2 猪传染性胃肠炎病毒分子生物学研究进展 | 第13-19
页 |
3 猪传染性胃肠炎病毒与猪呼吸道冠状病毒的鉴别诊断 | 第19-24
页 |
4 本实验的目的和意义 | 第24-25
页 |
1.材料 | 第25-27
页 |
· 病毒和细胞 | 第25
页 |
· 质粒与菌株 | 第25
页 |
· 血清 | 第25
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· 主要试剂 | 第25
页 |
· 主要仪器设备 | 第25-27
页 |
2.方法 | 第27-35
页 |
· 表达菌株pET32a-SBC和pET32a-N的复苏与鉴定 | 第27-28
页 |
· 重组质粒pET32a-SBC的复苏与鉴定 | 第27-28
页 |
· 重组质粒pET32a-N的复苏与鉴定 | 第28
页 |
· 重组pET32a-SBC和pET32a-N的表达 | 第28-30
页 |
· 原核表达质粒在大肠杆菌中的表达及表达产物的SDS-PAGE | 第29
页 |
· 重组蛋白活性分析 | 第29-30
页 |
· 重组SBC和N蛋白的纯化及含量测定 | 第30
页 |
· 间接ELISA检测TGEV与PRCV抗体的方法建立与优化 | 第30-33
页 |
· 间接ELISA方法的操作程序及判定标准 | 第31
页 |
· 间接ELISA检测TGEV与PRCV抗体的反应条件优化 | 第31-33
页 |
· 间接ELISA特异性试验 | 第33
页 |
· 间接ELISA重复性试验 | 第33
页 |
· 临床猪血清检测 | 第33
页 |
· 血清中和试验 | 第33-35
页 |
3. 结果 | 第35-52
页 |
· 重组pET32a-SBC的PCR和双酶切鉴定 | 第35
页 |
· 重组pET32a-N的PCR和双酶切鉴定 | 第35-36
页 |
· 重组质粒pET32a-SBC和pET32a-N表达结果 | 第36-38
页 |
· 重组SBC和N蛋白的SDS-PAGE结果 | 第36-37
页 |
· 重组蛋白Western-blotting鉴定 | 第37-38
页 |
· 间接ELISA检测TGEV与PRCV抗体方法的最佳反应条件 | 第38-47
页 |
· 以重组SBC蛋白为抗原的ELISA最佳反应条件的确定 | 第38-42
页 |
· 以重组N蛋白为抗原的ELISA最佳反应条件的确定 | 第42-46
页 |
· SBC蛋白包被孔阴阳性临界值的确定 | 第46
页 |
· N蛋白包被孔阴阳性临界值的确定 | 第46-47
页 |
· 间接ELISA检测TGEV与PRCV抗体方法的特异性试验 | 第47-48
页 |
· 间接ELISA重复性试验 | 第48-49
页 |
· 临床猪血清检测 | 第49-50
页 |
· ELISA临床检测与血清中和试验对照比较 | 第50-52
页 |
· SBC蛋白包被孔实验结果与血清中和试验对照比较 | 第50-51
页 |
· N蛋白包被孔实验结果与血清中和试验对照比较 | 第51-52
页 |
4.讨论 | 第52-55
页 |
· 蛋白质纯化 | 第52
页 |
· 选择TGEV SBC和N的原因 | 第52-53
页 |
· 表达载体的选择 | 第53
页 |
· ELISA反应的最佳条件 | 第53-54
页 |
· ELISA诊断和血清中和试验临床检测的对比 | 第54
页 |
· ELISA试验临床检测结果 | 第54-55
页 |
5.结论 | 第55-56
页 |
参考文献 | 第56-64
页 |
致谢 | 第64-65
页 |
附录 | 第65
页 |