论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 第一部分 文献综述和选题目的及意义 | 第11-17页 |
| 第一章 疱疹病毒UL53基因及其编码蛋白的研究进展 | 第11-17页 |
| 1. 疱疹病毒UL53基因及其编码囊膜糖蛋白K的研究进展 | 第11-16页 |
| · 疱疹病毒囊膜糖蛋白K简介 | 第11页 |
| · 疱疹病毒UL53基因及其编码蛋白K的特点 | 第11-13页 |
| · UL53基因序列的特征 | 第11页 |
| · UL53基因的类型 | 第11-12页 |
| · UL53基因编码糖蛋白K的类型 | 第12页 |
| · UL53基因编码糖蛋白K的特征 | 第12-13页 |
| · 糖蛋白K序列相似性分析 | 第13页 |
| · 疱疹病毒UL53基因编码糖蛋白K的定位 | 第13-14页 |
| · 疱疹病毒糖蛋白K在感染宿主细胞中的定位 | 第13-14页 |
| · 疱疹病毒糖蛋白K在病毒粒子的定位 | 第14页 |
| · 疱疹病毒UL53蛋白的功能 | 第14-16页 |
| · 糖蛋白K在病毒穿入、装配、释放以及膜融合方面的作用 | 第14页 |
| · 糖蛋白K在病毒复制中的作用 | 第14-15页 |
| · 糖蛋白K和蛋白pUL20之间的相互作用 | 第15页 |
| · 糖蛋白K和其它蛋白之间的相互作用 | 第15页 |
| · 糖蛋白K在病毒毒力和宿主免疫方面的作用 | 第15-16页 |
| 2. 选题目的和意义 | 第16-17页 |
| 第二部分 试验研究 | 第17-65页 |
| 第二章 鸭病毒性肠炎病毒UL53基因及其编码糖蛋白K序列的生物信息学分析 | 第17-29页 |
| 1. 试验材料 | 第17-18页 |
| · 试验数据 | 第17-18页 |
| · 常用的生物信息学软件 | 第18页 |
| 2. 试验方法 | 第18-19页 |
| · DEV UL53基因核酸序列生物信息学分析方法 | 第18页 |
| · DEV gK氨基酸序列生物信息学分析方法 | 第18页 |
| · DEV UL53基因密码子偏嗜性分析方法 | 第18-19页 |
| 3. 试验结果 | 第19-27页 |
| · DEV UL53基因核酸序列的分子特性 | 第19-20页 |
| · DEV UL53基因最佳外显子分析 | 第19页 |
| · DEV UL53基因稀有密码子分析 | 第19-20页 |
| · DEV gK氨基酸序列的分子特性 | 第20-25页 |
| · DEV gK氨基酸序列的的保守区分析 | 第20页 |
| · UL53基因编码氨基酸序列相似性的比对 | 第20-21页 |
| · DEV gK氨基酸序列抗原表位预测 | 第21-22页 |
| · DEV gK氨基酸序列疏水性预测 | 第22页 |
| · DEV gK氨基酸序列表面可及性预测 | 第22页 |
| · DEV gK氨基酸序列柔性区域的预测 | 第22-23页 |
| · DEV gK氨基酸序列跨膜区域的预测 | 第23页 |
| · DEV gK氨基酸序列信号肽的预测 | 第23-24页 |
| · DEV gK氨基酸序二级、三级结构的预测 | 第24页 |
| · DEV gK氨基酸序翻译后修饰位点的预测 | 第24页 |
| · DEV gK蛋白亚细胞定位的预测 | 第24页 |
| · DEV gK蛋白理化性质的分析 | 第24-25页 |
| · DEV UL53基因密码子偏嗜性分析 | 第25-27页 |
| 4. 讨论 | 第27-29页 |
| · DEV UL53基因核酸序列的特征 | 第27页 |
| · DEV gK氨基酸序列的特征 | 第27-28页 |
| · DEV UL53基因密码子偏嗜性分析 | 第28-29页 |
| 第三章 鸭病毒性肠炎病毒UL53基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 | 第29-46页 |
| 1. 试验材料 | 第29-31页 |
| · 菌株及载体 | 第29页 |
| · 实验动物 | 第29页 |
| · 主要药品及试剂的配制 | 第29-31页 |
| · 克隆及亚克隆主要试剂 | 第30页 |
| · 蛋白表达及鉴定主要试剂 | 第30页 |
| · 多克隆抗体制备主要试剂 | 第30-31页 |
| · 主要仪器设备 | 第31页 |
| 2. 实验方法 | 第31-38页 |
| · DEV UL53基因及截段基因的扩增 | 第31-32页 |
| · DEV UL53基因及截段基因引物的设计 | 第31页 |
| · 模板DNA的制备 | 第31-32页 |
| · UL53基因及截段基因的PCR扩增 | 第32页 |
| · DEV UL53基因及截段基因T克隆的鉴定 | 第32-33页 |
| · DEV UL53基因及截段基因的T克隆 | 第32-33页 |
| · DH5a感受态细胞的制备 | 第33页 |
| · 连接液转化进入DH5a感受态细胞 | 第33页 |
| · T克隆鉴定 | 第33页 |
| · DEV UL53基因及截段基因表达质粒的构建 | 第33-34页 |
| · 重组蛋白的诱导表达及鉴定 | 第34-35页 |
| · 重组蛋白表达条件的优化及纯化 | 第35-36页 |
| · 诱导温度的优化 | 第35页 |
| · 诱导IPTG浓度的优化 | 第35页 |
| · 诱导时间的优化 | 第35-36页 |
| · 重组蛋白的纯化 | 第36页 |
| · 制备兔抗DEV tgK多克隆抗体及其效价测定 | 第36页 |
| · 多克隆抗体中和效价测定 | 第36-37页 |
| · DEV病毒毒力的测定 | 第36页 |
| · 中和效价的测定 | 第36-37页 |
| · 兔抗tgK IgG的纯化和鉴定 | 第37-38页 |
| · 兔抗DEV tgK IgG粗提 | 第37页 |
| · 兔抗DEV tgK IgG纯化 | 第37页 |
| · 兔抗DEV tgK IgG鉴定 | 第37-38页 |
| 3. 试验结果 | 第38-44页 |
| · DEV UL53基因的扩增及T克隆鉴定 | 第38页 |
| · 重组表达质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| · 重组蛋白的诱导表达及鉴定 | 第39-41页 |
| · 重组蛋白表达条件的优化及纯化 | 第41-42页 |
| · 收集血清及抗体中和效价的测定 | 第42-43页 |
| · 兔抗DEV tgK IgG的纯化及SDS-PAGE鉴定 | 第43-44页 |
| 4. 讨论 | 第44-46页 |
| · UL53基因引物的设计和重组表达质粒的构建 | 第44页 |
| · DEV UL53截段基因的表达 | 第44-45页 |
| · 多克隆抗体的制备及纯化 | 第45-46页 |
| 第四章 UL53基因转录与表达时相研究 | 第46-55页 |
| 1. 试验材料 | 第46-47页 |
| · 毒株、抗体及细胞 | 第46页 |
| · 主要试剂及其配制 | 第46页 |
| · 主要试剂 | 第46页 |
| · 试剂配制 | 第46页 |
| · 主要仪器设备 | 第46-47页 |
| 2. 实验方法 | 第47-49页 |
| · 实时荧光定量PCR法(FQ-RT-PCR)检测鸭病毒性肠炎病毒体外感染宿主细胞时UL53基因的转录情况 | 第47-48页 |
| · 引物的设计与合成 | 第47页 |
| · 引物特异性检测与两条标准曲线的绘制 | 第47页 |
| · 细胞培养及总RNA的抽提 | 第47-48页 |
| · RNA完整性检测及去除其中的DNA | 第48页 |
| · 反转录及样品检测 | 第48页 |
| · 核酸抑制试验鉴定UL53基因的类型 | 第48-49页 |
| · 试验原理 | 第48页 |
| · 细胞培养及RNA的抽提 | 第48-49页 |
| · 常规PCR检测样品 | 第49页 |
| · tgK蛋白体外表达动力学研究 | 第49页 |
| · 细胞培养及细胞蛋白提取 | 第49页 |
| · Western-blot检测 | 第49页 |
| 3. 试验结果 | 第49-53页 |
| · DEV UL53基因体外转录时相分析 | 第49-52页 |
| · 荧光定量PCR引物特异性检测 | 第49-50页 |
| · 荧光定量PCR标准曲线的绘制 | 第50-51页 |
| · 总RNA完整性及纯度检测 | 第51页 |
| · 样品检测及结果分析 | 第51-52页 |
| · 核酸抑制试验鉴定UL53基因类型 | 第52-53页 |
| · DEV gK蛋白表达时相分析 | 第53页 |
| 4. 讨论 | 第53-55页 |
| · 实时荧光定量PCR的研究方法 | 第53-54页 |
| · DEV UL53基因转录特征 | 第54页 |
| · DEV UL53基因表达特征 | 第54-55页 |
| 第五章 UL53基因编码蛋白在宿主细胞和鸭各组织的定位 | 第55-65页 |
| 1. 试验材料 | 第55-56页 |
| · 石蜡病料、病毒、抗体及细胞 | 第55页 |
| · 主要试剂及其配制 | 第55页 |
| · 主要试剂 | 第55页 |
| · 试剂配制 | 第55页 |
| · 主要仪器设备 | 第55-56页 |
| 2. 实验方法 | 第56-58页 |
| · 间接免疫荧光检测DEF中DEV gK定位方法的建立及条件优化 | 第56-57页 |
| · 间接免疫荧光检测DEF内DEV gK定位方法的建立 | 第56页 |
| · 间接免疫荧光检测DEF内DEV gK定位方法的条件优化 | 第56页 |
| · 特异性检测 | 第56页 |
| · 免疫荧光检测结果判定 | 第56-57页 |
| · gK在感染DEV的宿主细胞中的动态研究 | 第57页 |
| · 间接免疫荧光法(IFA)检测石蜡切片中DEV gK方法的建立及条件优化 | 第57-58页 |
| · 间接免疫荧光法(IFA)检测石蜡切片中DEV gK方法的建立 | 第57页 |
| · 间接免疫荧光法(IFA)检测石蜡切片中DEV gK方法的优化 | 第57页 |
| · 特异性试验 | 第57-58页 |
| · 检测结果判定 | 第58页 |
| · DEV gK在人工感染DEV鸭各组织内的定位分析 | 第58页 |
| 3. 试验结果 | 第58-63页 |
| · 间接免疫荧光检测DEF内DEV gK定位方法的条件优化 | 第58-59页 |
| · 条件优化 | 第58-59页 |
| · 特异性检测 | 第59页 |
| · gK在感染DEV宿主细胞中的定位分析 | 第59-60页 |
| · 间接免疫荧光法(IFA)检测石蜡切片中DEV gK方法的条件优化 | 第60页 |
| · 条件优化 | 第60页 |
| · 特异性试验 | 第60页 |
| · DEV gK在人工感染DEV的鸭各组织内的定位分析 | 第60-63页 |
| 4. 讨论 | 第63-65页 |
| · 关于蛋白定位研究的方法 | 第63页 |
| · DEV gK在宿主细胞中的定位分析 | 第63页 |
| · DEV gK在感染鸭各组织的定位分析 | 第63-65页 |
| 第三部分 结论 | 第65-66页 |
| 第四部分 参考文献 | 第66-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介及攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第73
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