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氟西汀对海马神经元生长的影响药学

[生化制药论文]     【关键词】  氟西汀;细胞培养;海马神经元;大鼠   氟西汀是5-羟色胺(5-HT)再摄取抑制剂之一,是 应用 较广的抗抑郁药。氟西汀除有抗抑郁作用外,尚可 治疗 其他中枢神经系统疾病。有 研究 表明,氟西汀对海马的神经保护作用是其发挥抗抑郁效应的机制之 一[1]。关于氟西汀对体外培养的海马神经元生长的 影响 未见报道,本研究初步探讨了氟西汀对原代培养的海马神经元生长的影响。      1 材料与 方法       1.1 新生大鼠海马神经元的分离和培养    技术方法在 参考 文献 [2]基础上加以改进。取出生24 h内的新生SD大鼠(东南大学医学院动物实验中心提供),无菌分离出双侧海马,用显微剪剪碎,D-Hanks液清洗2或3次,将剪碎的海马组织转移至离  心管中,加入等量0.25%的胰酶(美国Sigma公司),37 ℃消化30 min,中间振摇1或2次,加入10%的  DMEM/F12(美国Gibco公司)5 ml,轻轻吹打15次,然后1 000 r · min-1离心5 min,制成单细胞悬液,置于CO2 培养箱(德国Heraeus公司产品)中,差速贴壁30min,去除成纤维细胞,吸取未贴壁的细胞,并用200目  的不锈钢滤网过滤,收集过滤后的单细胞悬液于培养皿中,然后至离心管中,取一滴单细胞悬液进行计数,并用DMEM/F12将细胞密度调到1×106ml-1,然后接种于200 μg·ml-1多聚赖氨酸(美国Sigma公司)包被的6孔培养板中,转移至培养箱内培养,4 h后换为  无血清培养基,即含2% B27的Neurobasl培养基(美国Gibco公司),以后每3天半量换液1次。使用培养  6 d的神经元进行染色鉴定。     1.2 大鼠海马神经元的鉴定    1.2.1 烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色   取培养6 d 6孔培养板中的盖玻片进行神经元特异的NSE免  疫组织化学染色。弃去培养液,4%多聚甲醛室温固定1 h ,加入 0.3% H2O2甲醇去除内源性过氧化氢酶,0.1% T……
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投稿人:7uy     最后编辑:fibg
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