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人CD14转基因细胞系的建立药学

[生化制药论文]             作者:宁铂涛,汤永民,徐妍,陈燕飞,曹江 【摘要】  本 研究 构建人CD14真核表达质粒,建立转基因CD14阳性细胞系,为建立急性单核细胞白血病(M5)导向 治疗 动物模型提供研究材料。 从正常人外周血单个核细胞抽提总RNA,以无RNA酶的DNA酶处理,RT-PCR扩增CD14基因,T-A克隆测序并与GenBank中人CD14的基因序列比较核实。通过双酶切和体外连接法将目的基因克隆至表达载体pcDNA 3.1 (+ ); 用Superfect transfection reagent 将重组质粒pcDNA 3.1(+)/CD14 转染到C57BL/6小鼠黑色素瘤细胞B16,经G418 筛选,用流式细胞术检测CD14蛋白的表达情况,初步筛选出CD14阳性的细胞系B16/CD14。结果表明:测序及GenBank中序列比较结果显示扩增到的人CD14基因序列是正确的,酶切结果表明表达质粒构建正确。流式细胞术筛选到2个CD14阳性表达的细胞系B16/CD14(标准CD14-PE阳性细胞百分数分别为25.28%、36.59%,2F9-FITC为25.59%、36.32%)。结论: 建立了人CD14抗原阳性表达的鼠细胞系B16/CD14,为人M5动物模型的建立及其导向治疗的研究奠定了坚实的基础。 【关键词】  转基因细胞系   Establishment of  Murine Cell Line Transfected with Human CD14 Gene   Abstract This study was aimed to construct the CD14 eukaryotic expression vector,establish the transgeneic CD14 positive cell line in order to facilitate the establishment of a mouse model of antibody targeting therapy for human acute monocytic leukemia (AML-M5). Total RNA extracted from peripheral blood mononuclear cells was treated with RNAase-free DNAase,the human CD14 gene was cloned and sequenced through the RT-PCR and T-A clone techniques.Eukaryotic expressional vector pcDNA3.1(+)/CD14 was constructed b……
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投稿人:7uy     最后编辑:fibg
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