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siRNA靶向Her2逆转录病毒载体构建及其在SKOV3中的表达药学 |
[生化制药论文]
作者:周颖,凌斌,高婷,陈敏,冯定庆,程志祥,朱园园,赵卫东,石永云,王梅梅,祝怀平
【摘要】 目的 构建并鉴定Her2特异性siRNA逆转录病毒载体,将其导入SKOV3卵巢癌细胞中,并初步筛选有效抑制Her2表达的细胞株。 方法 体外合成含针对Her2特异基因序列的寡核苷酸并定向克隆入逆转录病毒载体RNAiReady pSIRENRetroQ,构建的载体通过测序、酶切鉴定后,脂质体介导下转染到包装病毒细胞株PT67中,嘌呤霉素筛选并挑选细胞克隆,收获病毒上清,将病毒上清转染SKOV3中,经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her2表达的SKOV3细胞株,并分别通过RTPCR和免疫组化方法鉴定抑制Her2表达的效果。结果 成功构建了重组逆转录病毒载体,转染包装病毒细胞株获得的病毒上清成功转染了SKOV3, 并且抑制了Her2的表达。结论 抑制Her2表达的SKOV3细胞株的建立,为观察转染siRNA的逆转录病毒表达载体的肿瘤细胞恶性生物学行为变化奠定了实验基础。
【关键词】 Her2;RNA干扰;逆转录病毒载体
Abstract:Objective To establish the stable SKOV3 cell lines with a persistent knockdown of Her2 by transfecting the recombinant retroviral vectors of siRNA specific for Her2 into SKOV3 cell line. Methods We synthesized oligonucleotides for Her2 in vitro, and cloned them into retroviral vector RNAiReady pSIRENRetroQ. Subsequently the plasmids were sequenced and digested to identify the successful construction of the recombinant retroviral vectors. The vectorsbased RNAi were transfected into packing cell line PT67, which was selected by puromycin later. SKOV3 was infected by the virus supernatant of stable PT67 cell lines, and the stable SKOV3……
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投稿人:7uy |
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最后编辑:fibg |
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