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| 原生质的培养技术 |
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原生质体培养从分离出原生质体至培养成株，至少包括四个关键步骤：一是分离关，要分离出纯净、完整而有活力的原生质体；二是分裂关，培养中的原生质体首先要使其重建细胞壁，然后诱导其分裂，尤其是诱导进行持续的细胞分裂；三是诱导愈伤组织或胚状体关，要使持续的细胞团继续长出愈伤组织或转为胚状体；四是器官发生和分化关，要使愈伤组织或胚状体进一步分化出器官或完整植株，所有的操作都在无菌的条件下进行。
原生质体分离
由于酶法分离具有产率高、技术路线较成熟等特点，故在目前的原生质体分离中被普遍采用。
酶法分离原生质体有顺序法和直接法。顺序法又称两步法，即先用果胶酶处理材料，降解细胞间层使细胞分离，再用纤维素酶水解细胞壁释放出原生质体。直接法又称一步法，将果胶酶和纤维素酶（有时再加半纤维素酶）等混合处理材料，酶解时间长短不一，短期温育一般4～6h，时间长的一般在酶液中过夜。两步法手续比较麻烦，目前国际上大多数采用一步法，其操作流程如下图所示。
酶法可在短时间内获得大量原生质体，且渗透收缩程度可以很低，缺点是不纯的酶制剂所含的杂质对原生质体可能有不同程度的毒害作用。
原生质体搜集和纯化
供体组织经过酶处理后，除得到大量游离出的完整原生质体外，还会有一些未消化的细胞和细胞团以及破碎的细胞等混合在其中。它们的存在又会对原生质体培养产生不良后果，因此有必要纯化原生质体。目前，纯化效果较好的方法有以下几种：……<<<<<全文未完，本文约1601个汉字，334个数字符号>>>>>
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| 投稿人：fg3 |
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时间：2006年2月16日 |
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最后编辑：dfdf |
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