[烟草法学论文] 摘 要 根据已报道 烟草蚀纹病毒 (TEV) 外壳蛋白基因序列,合成两个寡聚核苷酸引物,采用RT - PCR的方法获得 烟草蚀纹病毒山东(TEV-SD)分离物的外壳蛋白(CP)基因的 cDNA ,然后以 获得的 cDNA 为模板进行 PCR 扩增。将所得的 PCR 产物通过 T4 DNA 连接酶连接到原核表达载体 PET-22b (+)中,并转化大肠杆菌 BL21 。 序列分析表明: TEV -SD 的 CP 基因全长 789bp ,编码 263 个氨基酸;与 GenBank 中,已报道的 TEV 分离物的核苷酸序列有极高的同源性,达 94.1% ~ 98.6% 。37℃培养条件下, 经 IPTG(终浓度 1mmol/L )诱导,SDS-PAGE 电泳显示,表达的融合蛋白分子质量约为 33kDa 。用表达的特异性蛋白制备抗原,免疫家兔制备出病毒特异抗血清;抗血清的效价为 1/2048 ,且具有良好的特异性。 关键词 烟草蚀纹病毒;外壳蛋白基因;原核表达;抗血清 Cloning and Prokaryotic Expression of Coat Protein Gene of Tobacco Etch Virus and Preparation of Viral-specific Antiserum ZHU Chang-xiang, WANG Yu-jun, GUO Xing-qi, CHENG Yun-ji, WEN Fu-jiang* (1 : College of Life Science, Shandong Agricultural University, Taian, 271018, China ; 2 : College of Plant Protection, Shandong Agricultural University, Taian, 271018, China; 3 : Shandonmg Linyi Tobacco Company , Linyi 276000 , China) Abstract: Coat protein (CP) gene of tobacco etch virus (TEV) Shandong isolate was cloned by reverse transcription-polymorase chain reaction (RT-PCR), and was subcloned into pET-22b(+) prokaryotic expression vector. The recombinant vector was transformed into BL21 host strain of E.coli. ……
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