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快速分离镜检松材线虫技术

[林业专业论文]    摘要：总结了贝尔曼漏斗法分离镜检松材线虫实践经验，通过调高分离起始水温、室内气温和减少镜检液量、改变热杀死方式等措施，将常规分离镜检线虫时间从12h以上缩短到约6h。
    关键词：松材线虫；分离；镜检（英文标题、摘要、关键词在后面）
    贝尔曼（Baermann）漏斗法是线虫学研究的基本方法之一，这是1917年由贝尔曼提出的，其装置简单，操作方便，在松材线虫检疫检验和调查鉴定中被广泛应用。在利用贝尔曼漏斗法分离松材线虫时，常规的分离时间是24h后才能镜检是否有线虫[1]。在时间效率方面往往达不到分离工作量较大的森检部门和力求快检快放的检查站、进出境检疫机构对检疫速度的要求。运用实验室的常规设备加快分离镜检线虫的速度，显得日益重要。
    1 贝尔曼线虫分离法
    常规分离镜检法：将直径10 ~ 15cm的漏斗末端接一段长约10cm的乳胶管后置于漏斗架上，在乳胶管上装一止水弹簧夹。经剪碎或撕碎处理的分离材料用大小适当的纱布包好，放入盛满清水的漏斗中；由于趋水性和地球引力的作用，线虫就渐渐游离分离材料进入水中，最后都沉降到漏斗末端的乳胶管中；24h后打开止水弹簧夹，用培养皿接取线虫分离液约5 ~ 15ml，置于解剖镜下观察，用针或吸管将若干条成熟、特征易观察的线虫移至载玻片上的水滴底部；用酒精灯将载玻片上的线虫热杀死，最后用显微镜进行鉴别。
    2 快速分离镜检线虫技术
    2.1 快速分离技术
    2.1.1 提高分离水温在用贝尔曼漏斗法分离线虫时，将漏斗中的常温清水改用20～30℃的温水，这是加速分离线虫最有效的方法。
    据试验，在平均室温7.5～11.0℃的条件下，设10℃、20℃、30℃三个起始温度阶梯，结果是线虫的分离量和游离量随着起始水温升高……

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投稿人：rt454

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