[高血压医学论文] 作者:蔺淑梅,成军,杨媛,刘敏,张黎颖,郭江
【摘要】 目的 对未知功能基因C1转染人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)后的基因表达谱进行分析,探索该基因的表达对肝细胞基因表达谱的影响及其可能的调节功能线索。方法 以分子生物学技术构建C1的真核表达载体pcDNA3.1(-)C1,以表达质粒pcDNA3.1(-)C1转染HepG2细胞,空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA,逆转录为cDNA。 应用基因表达谱芯片技术对差异表达的mRNA进行检测和分析。结果 HepG2细胞经转染C1表达质粒后,有26条差异表达基因,其中24条基因表达水平下调,2条基因表达水平上调。这些差异表达的基因与细胞信号转导、凋亡、细胞增生分化及肿瘤的发生密切相关。结论 应用基因表达谱芯片成功筛选了C1转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明C1蛋白可能的生物学功能及乙型肝炎病毒核心蛋白的致病机制提供了理论依据。
【关键词】 乙型肝炎病毒;核心蛋白;反式激活基因;基因表达谱芯片
乙型肝炎病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)是组成核壳的主要成分,由183个氨基酸残基(aa)组成,分子质量为21-22ku。在HBV的生活周期中,HBcAg、mRNA和DNA聚合酶共同构成核心颗粒,在核心颗粒中完成病毒DNA的合成。HBcAg不仅具有保护病毒mRNA,防止其被RNA酶降解的作用,而且对于HBV前基因组RNA的装配、基因组DNA的合成亦有重要作用,还与病毒成熟、识别包膜蛋白以及病毒向细胞外释放等过程密切相关[12]。在介导免疫应答方面,HBcAg特异性CD4+ T细胞免疫应答是清除HBV的重要反应[3];另外,B细胞刺突尖部有HBcAg的抗原决定簇,可产生相应的体液免疫反应[4]。我们利用酵母双杂交系统3,以HBcAg作为“诱饵”,对白细胞cDNA文库中与HBcAg相互作用的蛋白进行研究,获得了一种能与HBV核心蛋白结合的新蛋白,将编码该蛋白的基……
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